[发明专利]一种口腔微生态制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种口腔微生态制剂，其特征在于，所述口腔微生态制剂是先将菌株分别接种于MRS培养基培养后，经真空冷冻干燥得到相应的单菌菌粉，再将所述单菌菌粉混合成混合菌粉，并与抗菌肽粗品、胞外多糖粗品、奶粉、甜味剂和辅料混合制备而成；

所述菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)KF-18、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)KF-20、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)KF-22和肠膜明串球菌(Leuconostocmesenteroides)KF-15；

所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)KF-18于2016年11月21日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC60118；

所述乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)KF-20于2016年11月21日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC60116；

所述乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)KF-22于2017年1月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC 60139；

所述肠膜明串球菌(Leuconostoc mesenteroides)KF-15于2017年1月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC 60138；

所述MRS培养基的配方为：蛋白胨10.0g、牛肉粉5.0g、酵母4.0g、葡萄糖20.0g、吐温-801.0mL、磷酸氢二钾2.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸三铵2.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15.0g和蒸馏水1000mL；所述菌株相对于MRS培养基的接种量为1～10％；

所述混合菌粉是由植物乳杆菌KF-18、乳酸乳球菌KF-20、乳酸乳球菌KF-22、肠膜明串球菌KF-15的单菌菌粉按(1～3)：(1～3)：1：1的质量比混合；所述混合菌粉为15.4～19.48％，奶粉为61.6～77.92％，抗菌肽粗品1～8％，胞外多糖粗品1～9％，甜味剂0.5～3％，辅料0.1～3％；

其中，所述抗菌肽粗品的制备包括如下步骤：

S11.将植物乳杆菌KF-18按1～8％的接种量接种到MRS培养基中，在35～37℃静置培养18～24h；

S12.再将步骤S11培养的植物乳杆菌KF-18以3～5％的接种量接种到10～15％的牛奶溶液中培养18～24h得到发酵液A；

S13.将发酵液A以3500～4500rpm的转速，4～10℃的条件下离心20～30min，取上清液B，将上清液B过1～3K的膜包，在-36～-40℃经真空冷冻干燥24～30h得到抗菌肽粗品；

所述胞外多糖粗品的制备包括如下步骤：

S21.将乳酸乳球菌KF-22按3～5％的接种量接种到MRS培养基中，35～37℃静置培养18～24h；

S22.再将步骤S21培养的乳酸乳球菌KF-22以3～5％的接种量接种到10～15％的牛奶溶液中培养18～24h得到发酵液C；

S23.将发酵液C经煮沸10～15min，冷却后以3500～4500rpm转速，4～10℃的条件下离心20～30min得到上清液D；

S24.将三氯乙酸水溶液加入上清液D中，在3500～4500rpm转速，4～10℃的条件下离心20～30min得到上清液E；然后在上清液E中加入无水乙醇静置20～24h，再以3500～4500rpm转速，4～10℃的条件下离心20～30min收集沉淀物；

S25.沉淀物用超纯水溶解后过1～3K的膜包，在-36～-40℃经真空冷冻干燥24～30h制得胞外多糖粗品。

2.根据权利要求1所述口腔微生态制剂，其特征在于，所述单菌菌粉的制备包括如下步骤：

S1.将权利要求1中所述菌株分别进行传代两次进行培养活化；

S2.将权利要求1中所述菌株以1～10％的接种量分别用MRS培养基培养之后，加入牛奶溶液保护剂，然后经-36～-40℃，24～30h真空冷冻干燥得到相应的单菌菌粉。