[发明专利]一种富硒发酵蚕蛹及其制作方法有效
申请号: | 201710241444.8 | 申请日: | 2017-04-13 |
公开(公告)号: | CN107006683B | 公开(公告)日: | 2020-06-16 |
发明(设计)人: | 王钰婷;李瑞雪;汪泰初;王伟;高新文 | 申请(专利权)人: | 安徽省农业科学院蚕桑研究所 |
主分类号: | A23K10/20 | 分类号: | A23K10/20;A23K10/12;A23K10/18;A23K20/20;C12N15/01;C12N1/16;C12N1/20;C12N1/14;C12R1/74;C12R1/69;C12R1/125;C12R1/225;C12R1/01 |
代理公司: | 安徽省蚌埠博源专利商标事务所(普通合伙) 34113 | 代理人: | 杨晋弘 |
地址: | 230031*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 发酵 蚕蛹 及其 制作方法 | ||
1.一种富硒发酵蚕蛹的制作方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)、单株发酵菌液制备
1)、高富硒活性突变菌株选育:将热带假丝酵母Candida tropicalis进行氮离子注入诱变,筛选出高富硒活性突变菌株;所述高富硒活性突变菌株选育具体为:热带假丝酵母Candida tropicalis采用YEPD液体培养基在培养平板上培养32-48h,挑取单菌落至含100ml YEPD液体培养基的250ml三角瓶中,以180-200rpm的转速震荡培养32h,之后菌液离心洗涤3-4次,制成单细胞悬液,使细胞浓度在108-109个/ml;然后,取0.1ml单细胞悬液均匀涂布到无菌培养皿中,置于超净工作台风干制成菌膜;接着,在N+注入机中进行离子注入,能量为16KeV,每个菌株做6个梯度剂量,每个剂量两个平板,N+注入剂量分别为1.5×1014、2.5×1014、4.0×1014、5.5×1014、7.0×1014、1.0×1015ion/cm2,并做真空对照平板;诱变完成后,加入1ml无菌水洗涤菌体,制成菌悬液;然后,菌悬液稀释105-9倍,涂布于含亚硒酸钠的筛选培养基,采用3,3'-二氨基联苯胺盐酸盐法测定酵母菌株硒的含量,经过多次诱变筛选,获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株,也就是高富硒活性突变菌株,命名为Candida tropicalis ahas17,其中,所述高浓度亚硒酸钠的浓度为220mg/L;
2)种子培养液制备:将高富硒活性突变菌株接种在斜面培养基中进行培养,得到斜面菌株;将上述斜面菌株接种于种子培养基中进行振荡培养,得到种子培养液;所述种子培养液制备具体为:将上述高富硒活性突变菌株Candida tropicalis ahas17接种在斜面培养基上,在温度为28℃的情况下培养32-48h,得到斜面菌株,其中,所述斜面培养基的成分组成为:葡萄糖15-20g/L、蛋白胨15-20g/L、酵母膏5-10g/L、亚硒酸钠20-30mg/L、琼脂12-18g/L;然后,将上述斜面菌株接种于80ml的种子培养基中,在温度为28℃的情况下以200r/min的转速振荡培养32-48h,得到种子培养液,其中,所述种子培养基的成分组成为:麦芽抽提物10-20g/L、蛋白胨10-15g/L、酵母膏5-10g/L、亚硒酸钠30-60mg/L;
3)发酵培养:将上述种子培养液接种至含有发酵培养基的发酵罐中进行发酵,在发酵产物中补加亚硒酸钠,继续发酵培养,收集发酵产物,得到高富硒活性突变菌株Candidatropicalis ahas17发酵菌液;所述发酵培养为:将所述种子培养液按体积百分含量为8-12%的接种量接种至含有发酵培养基的50L发酵罐中,其中,所述发酵罐的装液量为40-50%,在温度为28℃、溶氧控制在50-70%、pH值维持在5.5-6.0的情况下发酵16-20h至对数生长期,并在发酵产物中补加终浓度为60-80mg/L的亚硒酸钠,继续发酵培养20-24h,收集发酵产物,得到高富硒活性突变菌株Candida tropicalis ahas17发酵菌液;其中,所述发酵培养基的成分组成为:可发酵还原糖300-400g/L、硫酸铜0.035-0.05g/L、硫酸锰0.03-0.04g/L、硫酸亚铁0.35-0.45g/L、硫酸镁5.5-7.0g/L、硫酸锌2.5g-3.5g/L、氯化钙3.5g-5.5g/L、硫酸铵5-7g/L、氯化钠8.5g-11g/L、谷氨酸7-11g/L、L-半胱氨酸为11-1g/L,其余用蒸馏水补足;
4)米曲霉、枯草芽孢杆菌、发酵乳杆菌、乳酸片球菌单株菌发酵:将米曲霉、枯草芽孢杆菌、发酵乳杆菌、乳酸片球菌分别单独进行发酵,获得米曲霉发酵菌液、枯草芽孢杆菌发酵菌液、发酵乳杆菌发酵菌液、乳酸片球菌发酵菌液;其中,将米曲霉、枯草芽孢杆菌、发酵乳杆菌、乳酸片球菌分别单独进行发酵,获得发酵菌液,具体如下:
米曲霉采用PDA培养基培养36-72h,且接种量为2%-3%,摇床转速为180-200rpm,其中,PDA培养基的成份组成为:马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克、纯水1000ml;
枯草芽孢杆菌采用LB培养基培养24-36h,且接种量为2%-3%,摇床转速为180-200rpm,其中,LB培养基的成份组成为:胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、纯水1000ml;
发酵乳杆菌和乳酸片球菌采用MRS培养基培养24-36h,且接种量为2%-3%,摇床转速为180-200rpm,其中,MRS培养基的成份组成为蛋白陈10.0g、牛肉粉5.0g、酵母粉4.0g、葡萄糖20.0g、吐温80 1.0Ml、磷酸氢二钾2.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸三铵2.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、纯水1000ml;
(2)益生菌复合菌液制备
将高富硒活性突变菌株Candida tropicalis ahas17发酵菌液、米曲霉发酵菌液、枯草芽孢杆菌发酵菌液、发酵乳杆菌发酵菌液、乳酸片球菌发酵菌液按照(3-5):(2-4):(2-4):(1-3):(1-3)的体积比混合,制得益生菌复合菌液;
(3)新鲜培养基质添加
按质量浓度为2%-3%向所述益生菌复合菌液中加入新鲜培养基质;
(4)保护剂添加
按质量浓度为2.5-3‰向所述步骤(3)中得到的液体中加入山梨酸钾,并搅拌均匀,以获得制剂;
(5)蚕蛹处理
将新鲜蚕蛹置于通风干燥箱中,在温度为85℃的情况下烘干至含水量为30%,然后采用粉碎机粉碎,粉碎粒径为2mm;
(6)高活性富硒蚕蛹制备
称取50公斤粉碎处理过的蚕蛹,然后加入菜粕10-15公斤、麸皮10-20公斤和过夜放置后的自来水30-50公斤,搅拌均匀后,按照质量比为1%-2%的比例加入所述步骤(4)中制得的制剂1.0-2.7公斤,混合搅拌均匀,在35-45℃恒温下发酵36-72小时,然后进行烘干,即可制成高活性富硒蚕蛹。
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