[发明专利]一种人脂肪组织消化酶及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞分离技术领域，尤其涉及了一种人脂肪组织消化酶及其制备方法。

背景技术

人脂肪干细胞是可以进行细胞再生的多能成人干细胞，它们被称作“神奇的种子”，具有治疗疾病、使器官再生、甚至延年益寿的潜力，这对当前的行医方式有着很大的改变，如何快速、准确的分离高活力的脂肪干细胞是研发脂肪干细胞各项功能的前提。

目前普遍采用消化的方法进行人脂肪干细胞的分离、提取，但现有技术在操作过程中脂肪组织总是粘在一起，震荡时脂肪组织也会黏成团，即使移液器吹打不开；上清分离后放到培养瓶中在显微镜下观察，视野中会出现大量的组织碎片，仅有少量的细胞存在。

为了解决上述问题，人们通过改变消化酶配方或者消化方法来获取更优质的人脂肪干细胞。中国专利，公开号CN 102719396 A，公开了一种人体脂肪干细胞快速提取方法，该方法使用了专用的人脂肪组织消化剂，其成分包含胶原酶IV型、胰蛋白酶-EDT复合体、抗胰蛋白酶和二甲基亚砜，从而可以使脂肪间充质干细胞充分游离出来同时保护细胞不受伤害，最终获得充分游离且存活率高的人脂肪干细胞。中国专利，公开号CN 104357387 A，公开了一种人体脂肪干细胞的分离方法，使用含有低分子肝素钙的生理盐水清洗人脂肪组织，可很好的去处杂质，从而分离出纯度更高的人脂肪干细胞。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种用于临床级别分离脂肪干细胞的组织消化酶，该消化酶中包括胶原酶和DNA酶，大大缩短了消化时间，使消化粘稠度降低，添加青霉素可有效防止样本在采集的过程中污染以及运输过程中细菌的滋生。

一种人脂肪组织消化酶，包括按照重量份计的如下组份：胶原酶30-50份、DNA酶0.1-0.8份。

优选的，所述组织消化酶还包括抗生素。

优选的，所述抗生素包括青霉素4-10份、链霉素15-23份。

优选的，所述组织消化酶包括胶原酶40份、DNA酶0.4份、青霉素6份、链霉素20份。

一种人脂肪组织消化酶的制备方法，方法步骤如下：

S1：在无菌安全柜内称取胶原酶，加入DMEM培养基中；

S2：称取DNA酶加入S1制得的培养基中；

S3：称取青霉素和链霉素加入S2制得的培养基中；

S4：将S3制得的培养基经过0.22μm的滤网过滤，放置于4℃备用。

进一步的，所述DMEM培养基为低糖型。

一种人脂肪组织消化酶可应用于分离脂肪干细胞。

脂肪组织中含有血管和纤维组织以及大量的干细胞。胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理pH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质。在脐带消化酶中添加胶原酶就是为了特异性的水解脐带组织中的蛋白质，使间充质干细胞充分的暴露出来。在胶原酶中添加了DNA酶，DNA酶防止分离细胞时，细胞黏附聚集。

抗生素是青霉素与链霉素，自然环境下(不考虑人为产生的抗药性)，对青霉素不敏感的微生物绝大多数对链霉素敏感，反之亦然。两种抗生素搭配可以控制几乎全部常见细菌。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果在于：

本发明提出的一种人脂肪组织消化酶，在胶原酶中添加了DNA酶，DNA酶防止分离细胞时细胞黏附聚集，可有效降低消化粘稠度，缩短了脂肪组织的消化时间，分离得到的脂肪干细胞具有优良的增殖活性和分化能力；此外本发明的组织消化酶中还添加青霉素，可有效防止样本采集过程中会污染，抑制细菌滋生。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。

实施例1

一种人脂肪组织消化酶，包括按照重量份计的如下组份：胶原酶30份、DNA酶0.8份、青霉素4份、链霉素23份。

一种人脂肪组织消化酶的制备方法，方法步骤如下：

S1：在无菌安全柜内称取胶原酶，加入DMEM培养基中；

S2：称取DNA酶加入S1制得的培养基中；

S3：称取青霉素和链霉素加入S2制得的培养基中；

S4：将S3制得的培养基经过0.22μm的滤网过滤，放置于4℃备用。

实施例2

一种人脂肪组织消化酶，包括按照重量份计的如下组份：胶原酶50份、DNA酶0.1份、青霉素10份、链霉素15份。

制备方法同实施例1。

实施例3