[发明专利]用于血清蛋白质定量测定的肽段组合物及测定方法

说明书

本发明提供了一种用于血清蛋白质定量测定的肽段组合物，其特征在于，所述肽段组合物包括至少两条同位素标记的肽段，所述同位素标记的肽段的序列包含任意一条序列表SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.72中所示的氨基酸序列片段。上述用于血清蛋白质定量测定的肽段或肽段组合物，可用于基质复杂以及样品量少的蛋白质的定量测定，应用范围广，价格较低。

技术领域

本发明涉及食品级医学检验测定技术领域，特别是涉及一种用于血清蛋白质定量测定的肽段组合物及测定方法。

背景技术

随着人类基因组草图的完成，生命科学研究进入后基因组时代，而蛋白质组学研究是后基因组时代的核心内容之一，蛋白质组学是从整体的角度分析细胞内蛋白质的组成成分、表达水平以及修饰状态，进而了解蛋白质之间的相互作用与联系，达到揭示蛋白质功能与生命活动规律的目的。

作为蛋白质组学重要分支的之一的血清蛋白质组学，是通过分离技术获得特定人群的血清蛋白质，在蛋白质表达图谱的基础上，寻找与健康人群存在的差异蛋白质点或蛋白质峰，然后再通过鉴定技术确定差异蛋白，进而研究其结构和功能。

从1994年开始发展至今，蛋白质组学前10年的研究主要是对蛋白质进行定性研究，随着研究的不断深入，仅仅知道蛋白的种类及其修饰情况，已经不能满足研究工作的需要。研究发现，蛋白质量的多少以及其翻译后修饰程度的变化均与蛋白质的功能密切相关。因此，最近10年间定量蛋白质组研究迅速发展并成为蛋白质组学研究的主流。根据定量的目的不同，请参阅附图1所示，定量蛋白质组学可以分为两大类：相对定量蛋白质组学和绝对定量蛋白质组学。

目前对于目标蛋白的定量分析，多采用基于非内标肽段的绝对定量分析方法和基于稳定同位素标记的内标肽段的绝对定量分析方法。

基于稳定同位素标记肽段的绝对定量方式多采用制备一系列已知浓度的标准曲线，对检测待测样本的目标蛋白进行定量。具体的，有以下几种方法：(1)单纯使用标准品配制的外标，需要纯品标准品以及配置样品基质，可以用于基质不复杂和前处理过程不繁琐的样品，但是在实际检测上往往由于样品基质复杂无法使用；(2)添加稳定同位素标记的标准品配置的单一浓度内标，可以解决基质复杂和前处理过程繁琐的问题，但是单一浓度内标使得定量分析的线性范围狭窄，不能方便用于待测样品目标物浓度变化较大的血清样本中；(3)用与待测样品同样基质的不同浓度的标准品作为外标，然而实际测量中往往无法获得去除目标蛋白的空白基质以及相应的蛋白质标准品，即使目前能够获得的标准品蛋白质种类也很少，价格较高，测定成本较高；(4)添加稳定同位素标记的标准品配置的多个浓度内标，即先制备基于一个参考样本添加多个已知浓度的稳定同位素标记的标准品内标，根据稳定同位素的浓度计算出参考样本中的浓度，以此做标准曲线，在此基础上采用外标法测定待测样品的蛋白质浓度，既可以解决基质复杂和前处理过程繁琐的问题，又拓宽定量分析的线性范围，但是在测试未知样本时，每次都需要制备基于参考样本的标准曲线(通常大于5个点)，需要较多的样品量，测定过程复杂，当样品量过少时，无法采用该方法制备标准曲线，另外测量的准确性，完全取决于参考样本中目标蛋白浓度计算是否准确。

发明内容

基于此，有必要针对现有技术中无法便捷准确地定量测定血清中的蛋白质含量的问题，提供一种用于血清蛋白质定量测定的肽段组合物及测定方法。

本发明提供的一种用于血清蛋白质定量测定的肽段组合物，其中，所述肽段组合物包括至少两条同位素标记的肽段，所述肽段的序列包含任意一条序列表SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.72中所示的氨基酸序列片段。

在其中一个实施例中，所述肽段组合物的肽段摩尔份数为：

本发明还提供了一种血清蛋白质定量测定方法，其中，所述测定方法包括如下的测定步骤：

S100、样品预处理；