[发明专利]交联葡聚糖微球的交联度检测方法

说明书

本发明公开了一种交联葡聚糖微球的交联度检测方法，先用高碘酸钠与交联葡聚糖微球进行氧化还原反应，此时交联葡聚糖微球中未被交联剂修饰的葡萄糖残基被高碘酸钠定量氧化生成甲酸，氧化反应完成后，滴定生成的甲酸，从而计算出未修饰的葡聚糖质量，代入交联度＝(微球总质量‑未修饰葡聚糖质量)/微球总质量×100％的公式中最终测得微球的交联度。本发明开创性地对交联葡聚糖微球的交联度进行了定义，即微球中交联剂修饰部分的质量占整个微球质量的百分比。试验佐证本发明的交联度检测方法得到的交联度数值是正确、合理的，适用于科研和实际生产过程对微球交联度的检测。

技术领域

本发明涉及交联葡聚糖微球的交联度检测方法。

背景技术

葡聚糖是白色念珠菌在蔗糖介质中合成的一种以α-1,6-键连接的葡萄糖聚合物。葡聚糖无毒性且具有良好的生物黏附性、生物相容性、生物降解性和凝胶特性，在药物控释及栓塞治疗方面具有独特优势。葡聚糖是是良好的微球制备原料，葡聚糖微球在生物医药领域具有广泛的应用前景。

交联葡聚糖由葡聚糖在糖的长链间用交联剂交联而成，常用的交联剂为1-氯代-2,3-环氧丙烷，葡聚糖与1-氯代-2,3-环氧丙烷的交联产物的化学结构式如下。除了化学结构式中所表述的交联取代修饰，不可避免的葡聚糖与交联剂的交联产物中还会存在单取代修饰的情况，即交联剂的官能团只有一端与葡聚糖的基团连接，单取代修饰和交联修饰均视作交联产物。

此外，也可以使用其他交联剂与葡聚糖进行交联反应，例如BDDE、二乙烯基砜等。

目前行业内将不同规格型号的交联葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如,G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克,同样G-200为每克干胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、和G-200。G值越大，交联度越小，因此吸水量越大。因此,“G”反映了凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围。

对于交联葡聚糖微球，其交联度还对微球稳定性、机械属性具有显著影响，理论上来说交联度越大，微球越稳定，吸水能力越弱，耐酶解能力越强，同时机械强度越大。

我们虽然知道交联葡聚糖微球的交联度与其各项性能密切相关，可通过产品的吸水性、粘弹性、耐酶性、推挤力等指标佐证其交联度，但是在实际生产过程中，对于每批次生产得到的交联葡聚糖微球，交联度只能通过间接的方法获取，即在反应过程中扣除各个后处理环节中残留的交联剂量来计算出参加反应的交联剂的量，从而间接得到该批产品的交联度。但由于该法未曾考虑各环节中交联剂自身的分解，故得出的交联度大都偏高，且此法不能直接对成品进行交联度的测定，故存在一定的限制。

关于行业内公开的交联产物的交联度检测方法，如交联HA凝胶修饰度的测定，是根据面积归一化法，总的修饰度t-MOD由分子排阻色谱图中修饰片段的峰面积计算得到；通过SEC-MS分析，悬挂修饰度(p-MOD，即上述单交联取代)和交联修饰度(c-MOD)由总离子流色谱图(TIC)中悬挂修饰和交联修饰片段的离子峰面积占比计算得到。上述对交联HA交联度的检测方法操作繁琐，设备昂贵，不普及，误差较大，结果不可靠，生产中不适用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种交联葡聚糖微球的交联度检测方法。

实现本发明目的的技术方案是一种交联葡聚糖微球的交联度检测方法，所述交联度是微球中交联剂修饰部分的质量占整个微球质量的百分比，其中修饰部分质量包括交联修饰的葡聚糖质量、单取代修饰的葡聚糖质量和交联剂片段三部分质量之和；检测方法如下：

用电子天平精密称取质量为m、单位g的受试交联葡聚糖微球，将其转移至容量为V_a mL容量瓶中，用移液管量取高碘酸钠溶液并转移至上述容量瓶中，摇匀，容量瓶外周用锡纸包好避光，在2℃～10℃下进行氧化还原反应；高碘酸钠溶液的加入量保证能完全氧化交联葡聚糖微球。