[发明专利]一种表达抗HIV双特异性抗体的微环DNA载体及其制备方法和应用

说明书

本申请涉及一种表达抗HIV双特异性抗体的微环DNA载体及其制备方法和应用。具体涉及一种用于在体内表达抗HIV双特异性抗体的微环DNA载体。所述抗HIV双特异性抗体结合HIV感染细胞，还能中和游离的HIV病毒。所述微环DNA载体、双特异性抗体用于预防或治疗艾滋病或HIV感染等病症。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种重组基因载体，更具体为一种用于在体内表达抗HIV双特异性抗体的微环DNA载体(MC.anti-HIV.BsAb)。

背景技术

人免疫缺陷病毒(HIV)感染严重威胁人类健康。HIV病毒感染细胞后，病毒基因组会整合进细胞基因组，形成原病毒(Protovirus)，作为病毒持续复制的模板。现有抗病毒治疗手段能抑制病毒复制，控制病毒载量，然而却无法彻底消灭带原病毒的细胞，从而清除原病毒库。只有清除受感染的细胞，才能实现清除原病毒库之目的。研究表明，部分HIV感染者机体免疫系统能产生广谱的HIV中和抗体，既能清除游离的病毒颗粒，也能通过ADCC作用清除受感染的细胞(如：CD4⁺细胞等)。但是ADCC介导的细胞杀伤作用有限，无法清除所有的感染细胞。

有证据表明，通过同时连接靶细胞和效应细胞(如：CD3⁺T细胞或CD16⁺NK细胞)，双特异性抗体可介导效应细胞对靶细胞的高效杀伤作用，比ADCC介导的杀伤效果强成千上万倍，特别适合于抗HIV治疗。此外，HIV处于隐匿状态时，病毒抗原不表达或处于极低表达水平，机体免疫和药物无法起作用。而CD3抗体对T细胞有激活作用，处于激活状态的T细胞转录活性增加，会促进靶细胞蛋白(包括整合于细胞基因组的病毒抗原)表达，使得双特异性抗体能够靶向作用于这些隐匿的感染细胞。与该发明最接近的技术是利用AAV载体表达HIV中和抗体AAV-anti-HIV(WO2012115980)，或者在体外表达纯化HIV双特异性抗体蛋白(WO2016054053)。

然而，现有的AAV表达抗体技术存在缺点，包括成本高昂、安全性隐患。具体包括：(a)AAV病毒载体的包装、纯化过程复杂，需要大量细胞培养，耗时耗力；(b)AAV病毒的保存、运输等过程需要低温环境，造成成本上升及使用不便；(c)AAV病毒外壳容易激起强烈的免疫反应，而且载体中携带的DNA序列随机插入容易导致基因突变，甚至致癌风险。

同样的，通过细胞培养在体外表达纯化HIV抗体的缺点主要是成本高昂，使用不便。具体包括：(a)抗体体外表达纯化工艺复杂，花费巨大；(b)蛋白保存、运输通常需要低温环境，要求较苛刻；(c)抗体使用需通过静脉或皮下注射，半衰期有限、需长期使用，加大了患者负担。

本发明旨在利用重组基因载体，尤其是微环DNA载体在体内表达抗HIV双特异性抗体(MC.anti-HIV.BsAb)，用于预防或治疗艾滋病，清除HIV感染。

发明内容

本发明涉及一种用于在体内表达抗HIV双特异性抗体的重组基因载体(尤其是微环DNA载体MC.anti-HIV.BsAb)，起到清除HIV感染细胞的作用。由于本发明的抗体抗HIV的部分来源于广泛中和抗体，因此表达的抗HIV双特异性抗体也能起到中和游离HIV病毒的作用。

本发明提供了一种表达抗HIV双特异性抗体的重组基因载体，所述双特异性抗体包括与HIV感染细胞特异性结合的第一抗原结合结构域，和与效应细胞特异性结合的第二抗原结合结构域；优选的，所述双特异性抗体还能中和游离的HIV病毒。

在一个实施方案中，优选的，所述重组基因载体选自非病毒基因载体；更优选的，所述重组基因载体选自微环DNA载体。

在一个实施方案中，所述效应细胞包括T细胞或NK细胞。优选的，所述第二抗原结合结构域特异性结合选自以下的作用靶点：CD3、CD28、4-1BB、OX40、TCR、CD16、CD56、NKG2D、NCR和其它。