[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定卷柏中穗花双黄酮含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定卷柏中穗花双黄酮含量的方法。

背景技术

2015年版药典方法：取本品粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

该方法的回流时间较长，对技术人员的专业水平较高。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种ASE-HPLC法测定卷柏中穗花双黄酮含量的方法，该方法萃取时间短、且检测精度高。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定卷柏中穗花双黄酮含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法萃取卷柏粉末，并收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的穗花双黄酮含量。

优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将卷柏样品粉碎，过三号筛，取0.2g与1g硅藻土混合；

步骤S2：将步骤S1所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤S3：用甲醇萃取，结束后用甲醇定容至25ml，离心，去上清液。

优选地，步骤S3所述的ASE萃取条件：压力为1500psi、温度为110℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为80％，吹扫时间为80％。

优选地，所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Thermo Syncronis C18；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；流动相为甲醇-0.1％磷酸；检测波长为330nm。

优选地，步骤S3所述的离心步骤的参数为：离心速度为15000r/min，离心时间为3min。

优选地，步骤S2所述的ASE萃取池的体积为5ml。

优选地，所述的色谱柱的规格为3*100mm，3μm。

优选地，所述的流动相为体积比等于55：45的甲醇-0.1％磷酸。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用甲醇回流5小时。本实验选用甲醇、乙醇、乙腈作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示甲醇提取后穗花杉双黄酮含量最高，故采用与药典一致的提取溶剂甲醇。

ASE提取原理如下所示：A:提高温度降低溶剂的黏度，减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；B:萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态(液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力)。

我们经过正交试验选择采用110℃，提取5min，提取3次，即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数3次。

附图说明

图1为穗花双黄酮对照品和采用ASE法萃取所得的样品溶液的色谱图；

图2为采用药典方法提取所得的样品溶液的色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次修改、仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色谱仪

1.2试剂：

水：符合GB/T 6682规定的一级水；

甲醇：色谱纯；

硅藻土：2mm；

2、方法

2.1对照品溶液的制备

取穗花双黄酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

2.2供试品溶液的制备

2015年版药典方法：取本品粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。