[发明专利]一种鲫造血器官坏死症综合防控方法

权利要求书

1.一种鲫造血器官坏死症综合防控方法，包括：

(1)饲养前池塘清塘，方法包括：利用冬季干塘捕鱼时机，对池塘进行清整消毒，先将池水排至5～10厘米深，按每亩60～75千克用量加入生石灰；或者在鱼种放养前10～15天，按照水深1米每亩用生石灰150～175千克用量对全池进行泼洒消毒；

(2)利用鲤疱疹病毒II型的PCR检测试剂盒对鲫鱼的亲鱼、鱼苗或鱼种进行检疫；

(3)鲫鱼鱼体消毒，方法包括：对亲鱼、鱼苗进行严格消毒，选择优质健壮鱼种，鱼种下塘前用10毫克/升漂白粉溶液或15～20毫克/升高锰酸钾水溶液药浴15～30分钟或用2％～4％食盐水溶液药浴5～10分钟；

(4)鲫鱼鱼体免疫预防；

＜50克以下鱼体用含0.1％～0.3％的鲫造血器官坏死症细胞灭活疫苗的水溶液浸泡0.5小时～2小时；≥50克以上鱼体，按每尾鲫鱼10～25微克的量注射酵母疫苗进行免疫预防；

所述的鲫造血器官坏死症细胞灭活疫苗，是采集刚死亡的感染鲤疱疹病毒Ⅱ型的病鱼肾脏和脾脏，剪碎并加等体积PBS匀浆，6000rpm 4℃离心30min后经0.22μm滤膜过滤制备成无菌组织匀浆液，分装后保存与-80℃备用；

通过GiCB培养至细胞单层80％后，弃去培养基经PBS清洗2遍后，将上述处理过的病料组织匀浆液上清1ml接种于GiCB细胞单层，加入终浓度为10μg/μl聚凝胺，25℃吸附2h,期间每隔15～20min轻微晃动培养瓶一次以便均匀吸附；待吸附结束后，换血清浓度为2％的M199维持液继续25℃培养，逐日观察细胞病变，至病变达80％后收获病毒后，用0.1％～0.2％甲醛灭活，制成的鲫造血器官坏死症细胞灭活疫苗，该疫苗的有效病毒含量在1×10⁵PFU/mL以上；

所述的酵母疫苗为SEQ ID NO.1所示的蛋白质；

(5)饲养过程中的池塘消毒，方法包括：水温在20～30℃时，鱼塘每月遍洒生石灰1～2次，按照水深1米每亩用生石灰13～15千克用量对全池进行泼洒消毒；每周食场周围泼洒生石灰1～2次，按照水深1米每亩用生石灰25～30千克用量对食场进行消毒；

(6)水温在20～30℃时，每10～15天，投喂含有抗病毒复方中药的饲料2～3天；

所述的含有抗病毒复方中药的饲料是通过将抗病毒复方中药煮水或开水浸泡20～30分钟后得到的溶液与饲料混合制得；所用的抗病毒复方中药的剂量为每公斤鱼体重0.5克抗病毒复方中药；

(7)池塘溶氧管理，池塘溶氧管理包括：天气晴朗时，中午增开1～2小时增氧机，不良天气时，白天延长开启增氧机时间，辅助使用水体增氧剂，饲养期间使鱼塘溶氧保持在每升≥5毫克；

(8)鱼塘搭配每亩50尾～100尾鳙鱼、每亩100尾～200尾鲢鱼、每亩5只～10只甲鱼，保证池塘处于生态平衡状态；

(9)养殖的1～5月和10～12月，每30～60日投放微生态制剂A一次，每亩1～2升，每毫升微生态制剂A包括：

枯草芽胞杆菌1×10⁸～3×10⁸个、屎肠球菌1×10⁷～3×10⁷个、产朊假丝酵母1×10⁷～3×10⁷个、动物双歧杆菌1×10⁷～3×10⁷个；

养殖的6～9月，每20～40日投放微生态制剂B一次，每亩1～2升，每毫升微生态制剂B包括：

枯草芽胞杆菌1×10⁸～3×10⁸个、苏云金芽胞杆菌1×10⁸～3×10⁸个、动物双歧杆菌1×10⁷～3×10⁷个、屎肠球菌1×10⁷～3×10⁷个、酿酒酵母1×10⁷～3×10⁷个、嗜酸乳杆菌1×10⁷～3×10⁷个、产朊假丝酵母1×10⁷～3×10⁷个；

(10)发病鱼塘消毒，发病鱼塘消毒包括：对已发病鱼塘遍洒生石灰1～2次，按照水深1米每亩用生石灰30～40千克用量对全池进行泼洒消毒；如果泼洒两次时，间隔时间为20～28小时；对已发病鱼塘遍洒聚维酮碘或季铵盐络合碘制剂，每立方米水体0.5～1毫升，连续泼洒2～3次，隔天1次；

(11)对已发病鱼塘减少饲料投喂量至正常量的50％～70％；

(12)对已发病鱼塘投喂含有抗病毒复方中药的饲料5～6天；

所述的含有抗病毒复方中药的饲料是通过将抗病毒复方中药煮水或开水浸泡20～30分钟后得到的溶液与饲料混合制得，所用的抗病毒复方中药的剂量为每公斤鱼体重1克抗病毒复方中药；

(13)治疗时，如发现鲫造血器官坏死症并发细菌感染，添加恩诺沙星或氟苯尼考拌饲料投喂，其剂量为每千克鱼体用药10～30毫克，每天1次，连用3～5天；

(14)发现患病鱼或病死鱼，必须及时打捞出鱼塘，并用生石灰填埋或焚烧销毁；

所述的饲料的配方包括：

组分含量

每毫升益生菌制剂C包括：枯草芽孢杆菌1×10⁷～3×10⁷个、费氏丙酸杆菌1×10⁷～3×10⁷个、乳酸片球菌1×10⁷～3×10⁷个、嗜酸乳杆菌1×10⁷～3×10⁷个；

所述的抗病毒复方中药的配方为：

所述的枯草芽胞杆菌保藏编号为CICC NO：10732；苏云金芽胞杆菌保藏编号为CICCNO：21298；动物双歧杆菌保藏编号为CICC NO：21709；屎肠球菌保藏编号为CICC NO：20671；酿酒酵母保藏编号为CICC NO：1008；嗜酸乳杆菌保藏编号为CICC NO：20250；产朊假丝酵母保藏编号为CICC NO：1314；费氏丙酸杆菌保藏编号为CICC NO：10019；乳酸片球菌保藏编号为CICC NO：10344；

以上所述的方法中，用生石灰处理鱼塘时，鱼塘pH值＜8.5。