[发明专利]跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的引物对、试剂盒及其扩增方法

权利要求书

1.一种跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的引物对，包括上游引物和下游引物，其特征在于：所述上游引物和下游引物之间的连续互补碱基小于或等于4对，所述上游引物和下游引物3’端和5’端的4个碱基中任意两个碱基不互补，所述上游引物和下游引物，至少有一条引物不具有二级结构，引物的GC含量为45-55%，Tm值为55-58℃。

2.一种跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的试剂盒，其特征在于：含有权利要求1所述引物对的试剂盒。

3.一种跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的扩增方法，其特征在于它按照如下的步骤顺序依次进行：

（1）从样品中提取DNA为模板；

（2）利用权利要求1的引物对或者权利要求2的试剂盒中引物对作为扩增的引物，进行SRCA扩增，得到扩增产物；

（3）检测扩增产物，做出判断。

4.根据权利要求3所述的跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的扩增方法，其特征在于所述SRCA的反应体系如下：

上游引物1μL；

下游引物1μL；

dNTPs 2.5mmol/L each5μL；

MgSO₄ 20mmol/L1μL；

10×reaction buffer 3μL；

Bst DNA聚合酶8U/μL1μL；

模板DNA 1μL；

二甲基亚砜0.2μL；

ddH₂O 6.8μL。

5.根据权利要求4所述的跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的扩增方法，其特征在于：所述SRCA扩增包括三个阶段：

预变性阶段：将权利要求4所述体系中除Bst DNA聚合酶外的其它物质加入离心管中，于94℃下加热3 min，然后立即取出离心管，冰浴2 min，冰浴结束后混匀离心管中液体；

扩增阶段：向上述离心管中加入Bst DNA聚合酶，将离心管置于孵育器中，于60-65℃下，反应90min；

终止阶段：将孵育器温度升高至80 ℃并加热5 min，使酶失活，终止反应。