[发明专利]一套中华和繁花猕猴桃种间杂交子代鉴定引物

说明书

本发明公开了一套中华和繁花猕猴桃种间杂交子代鉴定引物，涉及分子鉴定猕猴桃种间杂种后代的引物。获得方法：①实验材料收集；②中华猕猴桃和繁花猕猴桃线粒体和叶绿体基因组序列测定及特有核苷酸多态性位点（SNP）发掘；③选定包含多个中华猕猴桃和繁花猕猴桃物种特征SNP位点的DNA区域，开发出3对叶绿体和3对线粒体鉴定引物：④采用如上引物在中华猕猴桃（雌）和繁花猕猴桃（雄）杂交子代验证。本发明提供了一套鉴定猕猴桃种间杂种后代的分子引物；实验证明此套引物具有重复性好、稳定性高的特点；能够节省育种成本；用于快速鉴别杂交子代是否为真实的种间杂种后代，可加快猕猴桃育种进程。

技术领域

本发明涉及分子鉴定猕猴桃种间杂种后代的引物，尤其涉及一套中华和繁花猕猴桃种间杂交子代鉴定引物，用于快速鉴别杂交子代是否为真实的种间杂种后代，可加快猕猴桃育种进程。

背景技术

猕猴桃作为我国特有的雌雄异株多年生的藤本果树，因其丰富的营养价值和独特的风味已成为全球性重要水果。目前，我国猕猴桃产量和面积均居世界第一，在世界猕猴桃产业中具有举足轻重的地位；但我国猕猴桃品种性状仍然单一、产量低和品质差。猕猴桃属共有55个物种约75个分类单元，物种间具有广泛的果实表型、品质特性和遗传变异的丰富多样性，以果形美观、优质耐贮、丰产、抗逆等为育种目标，选择多个野生猕猴桃种作父母本与目前商业化栽培种（中华猕猴桃和美味猕猴桃）杂交，无疑将拓展猕猴桃品种的多样性，培育出性状优良的‘新型’猕猴桃品种。

然而，猕猴桃育种周期长，从杂交育种到开花结果需要3-5年，需要耗费大量的人力物力。此外，猕猴桃杂交子代早期的物种特征性状不明显，不能通过简单的性状判别去鉴定是否为真实的种间杂种。分子鉴定方法稳定、不受表型及环境变异影响，在判别种间杂交后代的真实性、缩短育种周期和推动作物育种发展方面具有独特优势。

猕猴桃的质体遗传独具特征：猕猴桃子代的叶绿体基因组基本属于父系遗传，线粒体基因属于母系遗传。因此，可通过发掘猕猴桃不同物种叶绿体和线粒体基因组特征序列，通过开发系列引物，基于简单PCR扩增出父本叶绿体和母本线粒体的特征DNA序列，判别子代是否为种间杂交后代。

发明内容

本发明的目的就在于提供一套中华和繁花猕猴桃种间杂交子代鉴定引物，适用于鉴定中华猕猴桃（雌）和繁花猕猴桃（雄）子代是否为真实的种间杂种后代，在童期就可以开展分子鉴定，节省育种成本。

本发明的目的是这样实现的：

一、一套中华和繁花猕猴桃种间杂交子代鉴定引物的获得方法（简称方法）

本方法包括下列步骤：

①实验材料收集

中华猕猴桃（雌）和繁花猕猴桃（雄）及其杂交子代群体建立；

②中华猕猴桃和繁花猕猴桃线粒体和叶绿体基因组序列测定及特有核苷酸多态性位点（SNP）发掘；

③选定包含多个中华猕猴桃和繁花猕猴桃物种特征SNP位点的DNA区域，开发出3对叶绿体和3对线粒体鉴定引物：

SEQ ID NO：7-12；SEQ ID NO：13-18；

④采用如上引物在中华猕猴桃（雌）和繁花猕猴桃（雄）杂交子代验证

验证测试样本为真实的杂交子代必须同时满足：引物1-3扩增出的序列与父本繁花猕猴桃相同；引物4-6扩增出的序列与母本中华猕猴桃相同。

所述的中华猕猴桃和繁花猕猴桃为猕猴桃属的两个物种，其中中华猕猴桃是目前商业化栽培的种，其果皮无毛、果肉黄色；

所述的繁花猕猴桃是猕猴桃属中可作为育种应用的一个种，长势旺盛、维生素C含量较高。

与现有技术相比，本发明具有下列优点和积极效果：