[发明专利]一种针对多种PDE-5抑制剂药物的免疫检测方法

说明书

本发明公开了一种针对多种PDE‑5抑制剂药物的免疫检测方法。首先合成了一种新型的小分子结构，以其为半抗原制备免疫原和包被原，从而制备抗体，构建针对多种PDE‑5抑制剂类药物的免疫检测方法。本发明的抗体及免疫检测方法可用于检测多种PDE‑5抑制剂类药物，首次实现同时对保健食品等样品中多种PDE‑5抑制剂药物残留检测，且抗体效价可达1：500000，对西地那非、瓦地那非、红地那非、米罗那非等PDE‑5抑制剂类药物及其类似物的检测特异性高、灵敏度好、准确度高，而且，检测快速，从而用于快速检测食品中残留的PDE‑5抑制剂，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域。更具体地，涉及一种针对多种PDE-5抑制剂药物(包括西地那非、瓦地那非、红地那非、米罗那非及其结构类似物)的免疫检测方法。

背景技术

西地那非、瓦地那非、红地那非、米罗那非等药物为PDE-5抑制剂，用于治疗男性勃起功能障碍，属于处方药。然而，一些保健食品生产企业为突出产品的功效，违法在保健食品中添加化学药物，如在抗疲劳产品中非法添加枸橼酸西地那非、他达那非、瓦地那非、红地那非等，对消费者身体健康构成严重威胁。目前市场许多声称具有补肾壮阳类、抗疲劳类、增强免疫力等作用的保健食品，违法添加了化学药品的现象可谓是触目惊心。添加的成分主要为：西地那非、他达拉非、瓦地那非，红地那非等。2016年5月国家食药监通报，补酒中查出西地那非，多家企业被查；2012年山西药监局公布的10种禁售保健食品中，7种含有PDE-5抑制剂，分别为西地那非，瓦地那非等；与此同时，北京、江苏无锡、安徽铜陵、江苏南通、南京、重庆、湖南衡阳等地的食品药品监督部门在当地的补肾、壮阳、抗疲劳保健食品抽检中均检出西地那非等PDE-5抑制剂；不仅如此，还有一些尚未被批准的西地那非的结构类似物被非法添加在保健食品、能量饮料、中草药中。2016年5月，食药监总局发布通告：明确禁止食品或保健食品添加西地那非等药物

在不知情的情况下服用了添加PDE-5抑制剂类药物的保健食品极易引发毒副作用，会出现头晕、昏晕、甚至青光眼，造成对肾功能、心脏功能、心血管疾病的严重损害。长期服用，还会导致食用者勃起不倒，伤及阴部肌肉组织，甚至加重阳痿，甚至变为永久性阳痿。因此针对多种PDE-5抑制剂残留问题，建立一种快速、有效的检测方法显得尤为重要。

PDE-5抑制剂类药物的检测最常使用的方法为仪器分析法，Hasegawa等利用LC-MS测定了保健食品中他达拉非、西地那非、伐地那非的含量。国内进出口行业标准(SNT4054-2014)中已把HPLC-MS法作为进出口保健食品中西地那非、他达那非、伐地那非的检测方法之一。该方法在片剂、胶囊剂中对三者的测定低限为1.0mg/kg，回收率在90～105％之间；口服溶液剂中对三者的的测定低限为0.01mg/L，回收率在94.5～108％之间。虽然上述几种仪器分析法的检测精确度高，但因其仪器化程度高、检测时间长、过程繁琐、检测费用昂贵，因而通常作为实验室确证方法，无法满足现场或者大批量的快速筛查检测。而免疫分析法因成本低、操作简单、速度快、一次检测样本量大、仪器化程度低，成为常用的筛选方法，现有技术中缺乏一种抗体同时检测多种PDE-5抑制剂药物的的免疫方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术中多种PDE-5抑制剂药物检测技术的缺陷和不足，提供一种针对多种PDE-5药物(包括西地那非、瓦地那非、红地那非、米罗那非及其结构类似物)的半抗原、人工抗原、抗体，从而构建了一种针对多种PDE-5抑制剂药物的免疫检测方法。

本发明的目的是提供一种针对多种PDE-5药物的半抗原、人工抗原、抗体。

本发明另一目的是提供所述半抗原、人工抗原和抗体的应用。

本发明的再一目的是提供一种直接检测多种PDE-5抑制剂药物的免疫分析方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：