[发明专利]主脉支撑叶片快速徒手切片方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物学领域，具体是一种主脉支撑叶片快速徒手切片方法。

背景技术

徒手切片技术，是植物学实验过程中常用的基本实验技术，可以切新鲜材料，观察到植物组织自然的色泽和活体结构，在植物学实验教学和科研中应用广泛。此法常用于观察植物体的结构、鉴定植物细胞组织的化学成分，近年来也常用于检测基因植株中报告基因的表达。通常要求材料具有合适的硬度和大小，过硬或过软的材料，徒手切片相对难度较大，其中，叶片的徒手切片，难度较大，因为叶片相对而言比较软，大多不能直接进行徒手切片，目前，文献报道的有这样几种方法：第一种是用夹持物(如马铃薯块茎的条状物)夹持，在切夹持物的同时，也获取叶片的切片，此法是目前教科书最常用的方法。优点是普适性很强，缺点是容易混杂夹持物的材料；第二种是用三个刀片捆绑，其中中间一片刀片缩进几毫米，利用缩进的缝隙，切得叶片薄片，优点是避免混杂夹持物材料，缺点是需要用三个刀片，成本较高，而且多个刀片捆绑，也增加了安全风险，厚度额定为刀片的厚度，不能根据需要调整厚度，因此对材料有一定要求。第三种是利用镊子夹住材料进行徒手切片，此法操作性不强，不太容易切薄；第四种是紧贴食指平行切割，是类似于平常切菜的一种方法，通过来回切割，食指的微小退缩，获取标本薄片，优点是不需要夹持物；缺点是安全风险大，不易切薄，并且，对材料也有所要求。第五种是乳胶管法，将直径1～1.5cm的乳胶管剪成3.5cm长的一段，用剪子从中间剖开扣在右手的大拇指上，注意皮套一定要高于拇指，把要切的植物材料，紧贴在皮套的外侧。如果是叶可以把它卷紧，所切的材料不可过长，大约2～2.5cm即可，此时用食指与中指和拇指一起把材料捏住，幼嫩的材料捏时不可用力过猛，以免损坏组织细胞，右手的拇指和食指捏住双面刀片的一侧，手腕端平，把刀片的前端与要切的材料保持垂直相接状态，先切平材料，然后用腕力向内连续切片，刀片只要搭住材料就可以垂直切片，优点也是不需要夹持物；缺点是成本高，且操作难度大，不太容易掌握，对材料有所要求。第六种对于革质的叶片，可将多片同等大小的叶片叠加一起，捏住，一起切，缺点是容易松散，不容易切薄；第七种对于革质的叶片，还可以将叶片卷成筒状，捏住，一起切，缺点是不太容易切薄，不容易切均匀。第八种是石蜡切片法，虽然获取的标本可以永久保存，但是制片流程长，耗时久，成本高，获取率低，且挥发性有机试剂利用量大，对人体、环境均有危害，另外，在制片的过程中用了高毒、强溶剂，很多小结构或成分被溶解，在脱水、透明的过程中容易丢失。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种主脉支撑叶片快速徒手切片方法，该方法能够避免夹持材料的混杂；耗时短、成本低、操作简单，能够轻松获取厚薄均匀的切片，便于观察新鲜叶片标本的细胞变化，而且过程所用溶剂少，危害小。

为解决上述技术问题，本发明提供一种主脉支撑叶片快速徒手切片方法，包括以下步骤：

(1)清洗与浸泡：将采集的发育成熟、没有病虫害、健康、完整的叶片放入清水中洗涤，叶柄置入清水中浸泡，待用；

(2)切割与修剪：取出一片叶片，沿着主脉两侧修剪，沿主脉两侧分别保留2～6mm宽叶片，整体长度2～6cm，并沿长度的一半处，一分为二，切成两段；

(3)材料的放置与拿捏：将两段含有叶片的主脉部分的上表皮面对面放置，左手的食指和拇指捏住材料，食指保持水平，拇指略低于食指，中指在下方稍作固定，起支撑作用，材料垂直于水平面；

(4)切片：右手握双面刀片，略微翻腕，保持刀片水平状态，刀片置于左手食指上方，从左前方向右后方平行拉动，即可获得含有主脉的叶片切片，置于盛有水的培养皿中暂存；

(5)染色、镜检：在载玻片的中央滴1滴清水，用沾有0.1％番红染料的胶头滴管在水滴中蘸一下(简称“浅染”，标准：水滴中呈现粉红色至浅红色即可，注意不要太多染料)，水滴呈现粉红色至浅红色，用毛笔的尖端挑选漂浮在培养皿水面上、透明的叶片切片，置于载玻片的水滴中；盖玻片的左侧边缘接触到水滴的左侧边缘，成45°角之后，缓缓放下，排除气泡，盖上盖玻片；擦去载玻片下方的水，将载玻片放置载物台上，使叶片切片对准通光孔，先低倍镜，后高倍镜观察叶片切片的细胞状态和结构层次并拍照。

为简单说明问题起见，以下对本发明所述的主脉支撑叶片快速徒手切片方法均简称为本方法。

经观察，叶片切片的导管和厚壁组织都被番红染成浅红或粉红，其它生活的细胞仍然保持绿色生活状态，结构层次清楚明了。