[发明专利]一种合相色谱‑串联质谱法测定烟用纸张中偶氮染料释放的特定芳香胺的方法

权利要求书

1.一种合相色谱-串联质谱法测定烟用纸张中偶氮染料释放的特定芳香胺的方法，其特征在于：样品剪碎后经还原分解，进行固相萃取，然后萃取液浓缩后，以合相色谱-串联质谱测定纸张中的芳香胺，内标法定量，具体包括以下步骤：

a、样品的提取：将样品剪成5 mm×5 mm左右的碎片，混合均匀；称取1.0g样品，将样品置于50 mL具塞离心管中，加入15 mL预热至70±2℃的柠檬酸缓冲液，猛烈摇动，使液体浸透样品，于70±2℃水浴中放置30 min；加入200mg/mL连二亚硫酸钠水溶液3 mL，保持70±2℃，反应30 min，然后将离心管置于冰水浴中于2min内冷却至室温；

b、样品净化：往离心管中分别加入0.5 mL的质量分数为40%的氢氧化钠溶液和100µL内标工作溶液，之后将离心管中的上层液体全部倒入提取柱中，任其吸附10～20min，然后用4*20mL叔丁基甲醚分4次洗提离心管中的下层样品，每次均需混匀叔丁基甲醚和样品，然后将叔丁基甲醚洗液倒入该提取柱中，收集叔丁基甲醚洗脱液于三角瓶中，往三角瓶中加入5～8 g的无水硫酸钠；

c、样品浓缩：移取8mL的洗脱液于带刻度的10mL氮吹管中，氮吹至近干，加入1 mL的甲醇复溶， 进UPC²-MS/MS分析；

d、准备标准工作溶液：称取0.01g各芳香胺的标准品到同一个10 mL容量瓶中，用甲醇稀释并最终配制成具有浓度梯度的标准工作溶液；

e、合相色谱-串联质谱测定:吸取配制好的不同浓度的标准工作溶液，注入合相色谱-串联质谱仪；色谱柱：规格100 mm×3.0 mm，1.7µm的 UPC² Fluoro-Phenyl柱；流动相：超临界CO₂/甲醇，流速：2mL/min；梯度洗脱； 柱温：50 ℃；背压：1800 psi；进样量：2µL；离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子扫描；毛细管电压：2.6KV；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气体流速：800 L/h；锥孔气体流速：50 L/h；补偿溶剂：0.1%甲酸甲醇溶液，流速为0.2 mL/min；检测方式：多离子反应监测（MRM）；

f、芳香胺残留量测定结果的计算

以内标法进行残留量的定量分析，即以目标物和内标的定量离子对峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，相关系数大于等于0.99，对提取后的样品进行测定，测得检出分析物和内标的定量离子对峰面积比，代入标准曲线，求得样品中各种芳香胺的残留量。

2.根据权利要求1所述的合相色谱-串联质谱法测定烟用纸张中偶氮染料释放的特定芳香胺的方法，其特征在于：所述内标为D₉-4-氨基联苯，内标工作溶液的配制方法如下：称取0.01g D₉-4-氨基联苯标准品到10mL容量瓶中，用甲醇稀释得到浓度为10 μg/mL的内标工作溶液。

3.根据权利要求1所述的合相色谱-串联质谱法测定烟用纸张中偶氮染料释放的特定芳香胺的方法，其特征在于：所述提取柱为迪马科技的ProElut AZO固相萃取小柱。

4.根据权利要求1所述的合相色谱-串联质谱法测定烟用纸张中偶氮染料释放的特定芳香胺的方法，其特征在于：标准工作溶液的配制方法如下：称取10 mg各芳香胺标准品到10 mL容量瓶中，精确至0.0001g，用甲醇定容，配制成浓度为1.0 mg/mL的混合标准储备液；移取混合标准储备液100 μL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，得到浓度为10 μg/mL的工作溶液；分别移取一定体积的工作溶液于10 mL容量瓶中，并加入100 μL内标工作溶液，用甲醇稀释定容，即配制成不同浓度的标准工作溶液，系列标准工作溶液中各芳香胺的含量分别为：0.5µg，1.0µg，2.0µg，5.0µg和10µg。

5.根据权利要求1所述的合相色谱-串联质谱法测定烟用纸张中偶氮染料释放的特定芳香胺的方法，其特征在于：梯度洗脱程序如下表：

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