[发明专利]轮状病毒-霍乱联合疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种轮状病毒-霍乱联合疫苗，其特征在于：所述疫苗包括：

a.霍乱疫苗，包括霍乱弧菌肠毒素蛋白(CT)及联合蛋白佐剂，其中联合蛋白佐剂通过基因重组构建在霍乱弧菌肠毒素B亚单位蛋白一端，霍乱弧菌肠毒素A亚单位蛋白与霍乱弧菌肠毒素B亚单位蛋白通过连接片段相连，形成重组CT全蛋白作为抗原，联合蛋白佐剂为大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位蛋白(LTB)，重组CT全蛋白为重组CT-LTB蛋白，构建的CT-LTB核酸序列如序列表SEQ ID NO：5所示，编码的载体蛋白序列如序列表SEQ ID NO：6所示；及

b.轮状病毒疫苗。

2.根据权利要求1所述的轮状病毒-霍乱联合疫苗，其特征在于：编码LTB蛋白的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。

3.根据权利要求1所述的轮状病毒-霍乱联合疫苗，其特征在于，编码CT蛋白的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：3所示，其编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示。

4.根据权利要求1所述的轮状病毒-霍乱联合疫苗，其特征在于：轮状病毒-霍乱联合疫苗为喷雾剂型、液体剂型、胶囊剂型、冻干粉剂、片剂和丸剂中的任何一种。

5.根据权利要求1所述的轮状病毒-霍乱联合疫苗，其特征在于：轮状病毒-霍乱联合疫苗还包括蔗糖，用于作为霍乱抗原的冻干制剂的冻干保护剂。

6.根据权利要求1所述的轮状病毒-霍乱联合疫苗的制备方法，其特征在于，步骤包括：

s1：根据CT和LTB的CDS区核酸序列，设计两对引物，构建pET28a-CT-LTB质粒，PCR扩增后，通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切，凝胶回收CT-LTB片段和表达载体pET28a；

s2.连接转化大肠杆菌DH5α菌株，筛选阳性克隆后进行单克隆扩增，IPTG诱导后鉴定。