[发明专利]基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于，所述联合疫苗包括：

a.霍乱疫苗，包括：霍乱抗原及抗原载体，其中霍乱抗原与抗原载体偶联，抗原载体为重组蛋白载体，由大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)蛋白及霍乱弧菌肠毒素B亚单位蛋白(CTB)基因重组获得重组载体蛋白，载体蛋白序列如序列表SEQ ID NO：6所示，霍乱抗原为多糖抗原；

b.轮状病毒疫苗；

轮状病毒疫苗与霍乱疫苗临用混悬。

2.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于，LTB核酸序列与CTB核酸序列通过引物序列桥接，构建的LTB-CTB核酸序列如序列表SEQ IDNO：5所示。

3.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：CTB核酸序列选自O139群霍乱全基因序列的CDS区。

4.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：编码LTB蛋白的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其编码的氨基酸序列如序列表SEQID NO：2所示。

5.根据权利要求4所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：编码CTB蛋白的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：3所示，其编码的氨基酸序列如序列表SEQID NO：4所示。

6.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：霍乱抗原为霍乱弧菌O139群霍乱荚膜多糖。

7.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：轮状病毒疫苗包括轮状病毒灭活疫苗或轮状病毒减活疫苗。

8.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法，其特征在于，步骤包括：

S1.根据LTB和CTB的CDS区核酸序列，设计两对引物，构建pET28a-LTB-CTB质粒，PCR扩增后，通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切，凝胶回收LTB-CTB片段和表达载体pET28a；

S2.连接转化大肠杆菌DH5α菌株，筛选阳性克隆后进行单克隆扩增，IPTG诱导后鉴定；

S3.将霍乱抗原与重组载体蛋白进行偶联，偶联后检测结合产物。

9.根据权利要求8所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法，其特征在于，S3具体为：

将霍乱多糖与重组载体蛋白进行偶联，多糖与载体蛋白按质量比为0.5～4：1，偶联后检测结合产物。