[发明专利]基于ARMS‑PCR检测人MTHFR基因多态性的方法、引物及试剂盒

权利要求书

1.人MTHFR基因SNP检测引物组，用于检测人MTHFR基因上rs1801133号和rs1801131号SNP位点的基因型，其特征在于，包括用于检测所述rs1801133号SNP位点的C/C基因型的引物对、用于检测所述rs1801133号SNP位点的T/T基因型的引物对、用于检测所述rs1801131号SNP位点的A/A基因型的引物对、用于检测所述rs1801131号SNP位点的C/C基因型的引物对；其中，

所述用于检测rs1801133号SNP位点的C/C基因型的引物对具有与SEQ ID NO:1所示序列80％以上相同的上游序列和与SEQ ID NO:3所示序列80％以上相同的下游序列；

所述用于检测rs1801133号SNP位点的T/T基因型的引物对具有与SEQ ID NO:2所示序列80％以上相同的上游序列和与SEQ ID NO:3所示序列80％以上相同的下游序列；

所述用于检测rs1801131号SNP位点的A/A基因型的引物对具有与SEQ ID NO:4所示序列80％以上相同的上游序列和与SEQ ID NO:6所示序列80％以上相同的下游序列；

所述用于检测rs1801131号SNP位点的C/C基因型的引物对具有与SEQ ID NO:5所示序列80％以上相同的上游序列和与SEQ ID NO:6所示序列80％以上相同的下游序列。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述用于检测rs1801133号SNP位点的C/C基因型的引物对的上游序列如SEQ ID NO:1所示，下游序列如SEQ ID NO:3所示；所述用于检测rs1801133号SNP位点的T/T基因型的引物对的上游序列如SEQ ID NO:2所示，下游序列如SEQ ID NO:3所示；所述用于检测rs1801131号SNP位点的A/A基因型的引物对的上游序列如SEQ ID NO:4所示，下游序列如SEQ ID NO:6所示；所述用于检测rs1801131号SNP位点的C/C基因型的引物对的上游序列如SEQ ID NO:5所示，下游序列如SEQ ID NO:6所示。

3.根据权利要求1或2所述的引物组，其特征在于，所述上游序列的3’端的最后一个碱基标记有锁核酸修饰。

4.基于ARMS-PCR检测人MTHFR基因多态性的PCR反应试剂盒，其特征在于，包含有权利要求1-3任一项所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含有人MTHFR基因上rs1801133号SNP位点C/C型质粒的标准品、rs1801133号SNP位点T/T型质粒的标准品、rs1801131号SNP位点A/A型质粒的标准品、rs1801131号SNP位点C/C型质粒的标准品。

6.基于ARMS-PCR检测人MTHFR基因多态性的方法，其特征在于，步骤包括：

1)提取样本DNA并纯化；

2)以步骤1)所得DNA为模板，在编号为A、B、C、D的四个PCR反应管内，同时进行实时荧光定量PCR扩增反应；其中：

A管内加入权利要求1-3任一项所述的用于检测所述rs1801133号SNP位点的C/C基因型的引物对；

B管内加入权利要求1-3任一项所述的用于检测所述rs1801133号SNP位点的T/T基因型的引物对；

C管内加入权利要求1-3任一项所述的用于检测所述rs1801131号SNP位点的A/A基因型的引物对；

D管内加入权利要求1-3任一项所述的用于检测所述rs1801131号SNP位点的C/C基因型的引物对；

3)根据Ct值判断样本MTHFR基因的rs1801133号和rs1801131号两个SNP位点的基因型。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)，PCR反应条件为92～97℃预变性0.5～10min；92～97℃变性10～30s，56～60℃退火10～60s，40～50个循环。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤3)，基因型的判断方法为：Ct值≥36时，判为不表达；Ct值＜36，判为表达；当A管中表达，B管中不表达时，判断rs1801133的基因型为C/C型；当A管中表达，B管中同时表达时，判断rs1801133的基因型为T/C型；当A管中不表达，B管中表达时，判断rs1801133的基因型为T/T型；当C管中表达，D管中不表达时，判断rs1801131的基因型为A/A型；当C管中表达，D管中同时表达时，判断rs1801131的基因型为A/C型；当C管中不表达，D管中表达时，判断rs1801131的基因型为C/C型。