[发明专利]检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC‑30毒株的RT‑PCR方法在审
| 申请号： | 201710261905.8 | 申请日： | 2017-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN106868224A | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 张斌;岳华;汤承;王远微;覃思楠 | 申请（专利权）人： | 西南民族大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 610041 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 猪蓝耳 病毒 经典 致病性 变异 nadc 30 rt pcr 方法 | ||
1.一种检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的引物，用于RT-PCR反应，其特征在于，该引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
2.一种检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的RT-PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：
以待检测样品的RNA为模板，反转录得到cDNA，用权利要求1中所述的引物，对待测样本进行RT-PCR扩增，用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物；扩增产物大小为887bp，则样本中含有或候选含有猪蓝耳病毒经典毒株；扩增产物大小为797bp，则样本中含有或候选含有高致病性变异毒株；扩增产物大小为493bp，则样本中含有或候选含有NADC-30毒株。
3.根据权利要求2所述的检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的RT-PCR方法，其特征在于，用购自宝生物工程(大连)有限公司的反转录试剂盒进行反转录，所述反转录的步骤为：将RNA模板4μL与1号5×Prime Script Buffer 4μL、2号Prime ScriptRT Enzyme Mix 1μL、4号Random 6mers 2μL和5号RNase Free dH2O 9μL混匀，放入PCR仪上进行反转录。
4.根据权利要求2所述的检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的RT-PCR方法，其特征在于，所述反转录的反应条件为：37℃15min，85℃15s，16℃10min。
5.根据权利要求2所述的检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的RT-PCR方法，其特征在于，所述RT-PCR扩增的反应体系如下：模板cDNA 3μL，Quick Taq HS DyeMix 10μL，上游引物和下游引物各0.6μL，余下的由ddH2O补足，总量为20μL。
6.根据权利要求2所述的检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的RT-PCR方法，其特征在于，所述RT-PCR扩增的反应体系条件如下：94℃预变性2min；94℃变性30s，55℃退火30s，68℃延伸1min，共35个循环；72℃延伸8min。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于西南民族大学，未经西南民族大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710261905.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
