[发明专利]猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒

说明书

本发明提供猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒，属于生物技术检测领域。分泌抗猪圆环病毒2型单克隆抗体的杂交瘤细胞株1G9，保藏号为：CCTCC NO:C2016105。猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒，包括:检测抗体和包被有所述抗猪圆环2型单克隆抗体的酶标板，所述检测抗体为酶标记的抗猪圆环2型单克隆抗体。本发明猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒，仅采用一种抗体作为包被和检测抗体，制备方法简单、成本低、抗原广谱性好、灵敏度高、特异性高。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒。

背景技术

猪圆环病毒2型(Porcine circovirustype2，PCV2)属于圆环病毒科圆环病毒属，为无囊膜的单股负链环状DNA病毒，直径在17-20nm，是已知的最小的动物病毒之一。依据猪圆环病毒2型结构蛋白Cap的编码基因，可细分为多种基因型，如PCV2a、PCV2b、PCV2c等，其中起主要致病作用的PCV2b又存在多个毒株。PCV2感染可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、怀孕母猪繁殖障碍、断奶猪和育肥猪呼吸道疾病、猪皮炎和肾炎综合征、幼龄仔猪先天性震颤等疾病。PCV2感染于20世纪90年代相继在加拿大、美国、欧洲、东南亚猪群中被发现。我国自2000年出现首例猪圆环病毒感染的报道以来，PCV2感染猪群状况严重，表现为流行范围广，阳性率高，混合感染，种猪感染率高，严重阻碍养猪业的发展。

目前，猪圆环病毒相关疾病的预防主要依赖免疫PCV2病毒灭活疫苗和表达PCV2Cap蛋白的基因工程疫苗。国内各厂家生产的灭活疫苗所用毒株有a基因型的PCV2-SH株和多个b基因型的PCV2毒株。由于我国流行圆环病毒为PCV2b型，因此采用PCV2b毒株制备的疫苗在疫病防控中效果更佳。

灭活疫苗质量控制的重点之一是抗原的含量，检测方法均是基于抗体技术的免疫学方法。生产中采用的是间接免疫荧光法(IFA方法)测定发酵病毒滴度。该方法操作周期长(一周)、设备要求高(荧光显微镜)。目前也有采用夹心ELISA技术开发的PCV2抗原检测试剂盒。文献报道的试剂盒均采用单克隆抗体与多克隆抗体或者两种不同的单克隆抗体配对方式构建。前者存在批次间的稳定性较差、结果一致性较差的问题；在成本上，由于制备试剂盒需要生产多种抗体，生产方法较为复杂、成本较高。后一种方式构建的试剂盒在检测灵敏度上无法满足需求。

此外，实际应用中发现，市售单克隆抗体往往对各厂家所用的不同PCV2毒株的广谱识别性差，检测工作依赖价格昂贵的进口PCV2单抗或多抗检测血清。因此，克服现有试剂盒存在的问题，开发一种能够用于多个PCV2毒株检测的猪圆环病毒2型抗原检测试剂盒，对试剂盒的主要材料-单克隆抗体提出了更高的要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒，该试剂盒的检测抗体是将包被抗体进行酶标记后获得的，制备方法简单、成本低、抗原广谱性好、灵敏度高、特异性高、重复性好。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

本发明提供一种分泌抗猪圆环病毒2型单克隆抗体的杂交瘤细胞株1G9，保藏号为：CCTCC NO:C2016105。

本还发明提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体。

本还发明提供一种猪圆环病毒2型抗原定量检测试剂盒，该检测试剂盒包括:检测抗体和包被有所述抗猪圆环2型单克隆抗体的酶标板，所述检测抗体为酶标记的权利要求2所述抗猪圆环2型单克隆抗体。

优选的技术方案中，所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的权利要求2所述抗猪圆环2型单克隆抗体。

优选的技术方案中，在于所述酶标板是采用0.5-1.5μg/mL抗猪圆环2型单克隆抗体包被的；所述检测抗体的浓度为400-600ng/mL。