[发明专利]一种条件性基因表达调控系统

说明书

本发明公开了一种条件性基因表达调控系统，该系统由目标基因的表达载体和位点特异性重组酶的表达载体两部分组成，目标基因的读码框中插入了内含子序列，在内含子序列中插入一个位点特异性重组酶的识别序列，在目标基因的5＇或者3＇端也插入一个位点特异性重组酶的识别序列，两个识别序列的方向相反且两者之间的DNA片段反向放置。本发明使得正常情况下目标基因不能表达，在位点特异性重组酶的作用下，两个识别序列发生重组使得两者之间的DNA片段方向发生颠倒，从而使目标基因恢复正常表达。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种条件性基因表达调控系统。

背景技术

基因的条件性表达是指在药物或者其它基因的诱导下，实现目标基因在特定的时间或特定的空间表达，该技术在基因的功能研究以及基因治疗中具有重要的意义。

目前常用的条件性基因表达调控系统有Tet on、Tet off、Cre-loxp、Flp-FRT等，然而，由于不同因素的影响，这些调控系统本底表达仍然较高。Tet on、Tet off系统依赖于药物Dox与Tet结构域结合后使得相应的转录因子与启动子结合或者脱离，从而实现诱导性表达，但由于药物Dox不与Tet结合的情况下转录因子仍然与启动子有一定程度的结合力，使得该系统本底较高。Cre-loxp和Flp-FRT原理相似，在启动子和目标基因之间插入转录终止信号，转录终止信号两端加入loxp序列，在CRE酶的作用下可以使启动子和基因之间的转录终止信号去除，从而使目标基因启动表达。该系统严谨性与Tet on、Tet off系统相比较好，但是由于转录终止信号并不能完全终止启动子的启动活性，因此该系统也存在一定的本底表达。

综上，目前仍没有一种足够严谨的条件性基因表达调控系统。

发明内容

针对上述基因表达调控严谨性不足存在的技术难题，本发明的目的在于，提供一种严谨性较高的条件性基因表达调控系统。本发明将目标基因分为两个段，将其中一段的方向跌倒，这样破坏了目标基因的正常编码顺序，使得正常情况下目标基因完全不能表达，而在位点特异性重组酶的作用下跌倒的片段恢复为正常方向后，目标基因的读码框恢复正常，基因才能正常表达。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种条件性基因表达调控系统，其特征在于，该系统由目标基因的表达载体和位点特异性重组酶的表达载体两部分组成，目标基因的读码框中插入了内含子序列，在内含子序列中插入一个位点特异性重组酶的识别序列，在目标基因的5＇或者3＇端也插入一个位点特异性重组酶的识别序列，两个识别序列的方向相反且两者之间的DNA片段反向放置。

所述目标基因的读码框中插入了内含子序列是指目标基因起始密码子和终止密码子之间的任意两个相邻碱基之间插入了内含子序列；所述在内含子序列中是指在内含子的剪切供体序列和剪切受体序列之间。

所述表达载体是真核表达载体。

所述位点特异性重组酶是CRE、FLP、ΦC31中的任意一种；所述位点特异性重组酶的识别序列是CRE酶识别的loxp序列、FLP酶识别的FRT序列、ΦC31酶识别的attB/attP中的任意一种。

所述内含子序列为SEQ ID No.1的内含子序列1，如下：

SEQ ID No.1：内含子序列1

GTAAGTATCAAGGTTACAAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCTCGAGTACAGAATTCATGATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAG。

所述内含子序列为SEQ ID No.11的内含子序列2，如下：

SEQ ID No.11：内含子序列2