[发明专利]IL‑2和IFNγ蛋白共表达的真核表达体系及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物基因技术领域，具体涉及一种真核表达体系及其制备方法和应用，特别是涉及IL-2和IFNγ蛋白共表达的真核表达体系及其制备方法和应用。

背景技术

白细胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)，又名T细胞生长因子(T Cell Growth Factor，TCRF)。IL-2是在促有丝分裂素或特异性抗原刺激下，由T淋巴细胞或T淋巴细胞系产生的在机体免疫反应中具有重要调节作用的一种细胞因子。IL-2是人体免疫调节网络中的核心物质，与其他免疫相关细胞因子有协同和拮抗作用，共同完成人体免疫机能的调节作用；其能够刺激NK、CTL、LAK等细胞的活化和增殖，也能促使T淋巴细胞、NK细胞等产生干扰素、肿瘤坏死因子等，在抗病毒、抗细菌感染和抗肿瘤等过程中发挥重要作用。在恶性肿瘤的发病过程中，存在免疫逃避导致的免疫监视功能异常。肿瘤患者体内的淋巴细胞，如NK、CTL、LAK等，不能正常发挥对肿瘤细胞的免疫杀伤效果。而前述免疫杀伤细胞的活化和增殖均是以IL-2为基础的[Dhupkar P,Gordon N.Interleukin-2:Old and New Approaches to Enhance Immune-Therapeutic Efficacy.Adv Exp Med Biol.2017；995:33-51.]。如果能够适时提供外源IL-2，就有可能协助患者的免疫系统改善对体内肿瘤细胞的免疫杀伤功能。这就是IL-2进行肿瘤免疫治疗的免疫学基础。目前的IL-2体内注射免疫治疗方法只是非特异地提高患者体内的IL-2蛋白水平，其免疫调节作用和促肿瘤杀伤能力较弱，而且缺乏特异性调节病灶肿瘤微环境IL-2水平、促进对肿瘤细胞进行特异性免疫治疗的作用[Humrich JY,Riemekasten G.Clinical trials:The rise of IL-2 therapy-a novel biologic treatment for SLE.Nat Rev Rheumatol.2016Dec；12(12):695-696.]。

γ干扰素(IFNγ)属于II型干扰素，是一种分泌型蛋白，分泌进而去除信号肽后其分子由143个氨基酸组成，相对分子量为40kDa，以同源二聚体或四聚体的形式存在。IFNγ主要由T细胞和NK细胞产生，其基因位于人的12号染色体上。IFNγ在临床上常用于抗病毒和抗肿瘤治疗[Textor A,Listopad JJ,Wührmann LL,Perez C,Kruschinski A,Chmielewski M,Abken H,Blankenstein T,Charo J.Efficacy of CAR T-cell therapy in large tumors relies upon stromal targeting by IFNγ.Cancer Res.2014 Dec 1；74(23):6796-805.]。IFNγ的体内应用可实现对多种病毒感染的抑制，从而在免疫调控方面获得广泛的应用。同时，IFNγ在体内具有抑制肿瘤细胞生长，阻碍恶性肿瘤转移和复发的功能。临床研究结果表明，IFNγ对白血病、黑色素瘤、神经胶质瘤、淋巴瘤及骨髓瘤等均可以产生明显的抑制效果。IFNγ主要通过调节免疫免疫细胞活性，促进免疫系统对原位肿瘤细胞和转移病灶中肿瘤细胞的杀伤，也可以通过直接诱导肿瘤细胞凋亡、坏死等方式直接杀伤肿瘤细胞，还可以通过干扰肿瘤细胞生长周期、抑制肿瘤组织的血管生成抑制肿瘤细胞增殖。但是目前的IFNγ体内注射治疗方法只能实现患者体内IFNγ蛋白水平的非特异性提高，难以实现对肿瘤微环境中IFNγ水平的特异性高效靶向调节[Konjevic G,Radenkovic S,Srdic T,Jurisic V,Stamatovic Lj,Milovic M.Association of decreased NK cell activity and IFNγexpression with pSTAT dysregulation in breast cancer patients.J BUON.2011 Apr-Jun；16(2):219-26.]。

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