[发明专利]一种鉴别枣花蜜与糖浆掺假枣花蜜的分析方法

权利要求书

1.一种应用超高效液相色谱-四极杆-轨道阱高分辨质谱技术结合代谢组学方法鉴别枣花蜜与糖浆掺假枣花蜜的分析方法，其特征是，包括以下步骤：

将真枣花蜜样品和与待检测的糖浆掺假枣花蜜样品分别采用有机溶剂进行前处理后，样品前处理中采用的有机溶剂是含有甲酸的甲醇和水的混合溶剂，应用超高效液相色谱-四极杆-轨道阱高分辨质谱方法实现对前处理后的样品中的化学成分的分离与测定，然后对得到真枣花蜜样品与待测的枣花蜜样品的UHPLC-MS原始数据进行预处理，最后应用多元统计分析方法主成分分析(PCA)模型区分真枣花蜜与糖浆掺假枣花蜜；

超高效液相色谱条件为：A相：乙腈，B相：醋酸铵水溶液，梯度洗脱流程：0-2min 1％A,2-3.25min 1％-5％A，3.25-4.25min 5％A,4.25-7.75min 5％-55％A,7.75-9.75min55％-90％A,9.75-11.75min 90％A,11.75-12min 90％-1％A,12-15min 1％A；流速：0.2～0.5mL/min，柱温30～37℃；

将得到的枣花蜜样品与糖浆掺假枣花蜜样品的UHPLC-MS原始数据采用CompoundsDiscoverer软件进行预处理，该预处理是指对总离子流图原始数据中的色谱峰的提取、峰对齐、去噪音、未知物的检测处理，得到各个峰的保留时间、峰高、峰面积和质荷比数据；然后通过多元统计分析方法PCA得分图的形式对区分结果进行展示。

2.如权利要求1所述的分析方法，其特征是：所述糖浆包括大米糖浆、玉米糖浆、甜菜糖浆或复合果葡糖浆。

3.如权利要求1所述的分析方法，其特征是：甲酸的体积分数为1％，甲醇和水为等体积混合形成混合溶剂；

样品前处理过程包括：将样品与有机溶剂混合至样品完全溶解，超声，离心，过有机滤膜，得到可上机检测的样品；其中，超声时间为10～30min；离心条件：800～1200rpm离心4～8min；有机滤膜的孔径为0.20～0.25μm；样品与有机溶剂的添加比例为1g：(15～25)mL。

4.如权利要求1所述的分析方法，超声时间为25min；离心条件：1000rpm离心5min；有机滤膜的孔径为0.22μm。

5.如权利要求1所述的分析方法，其特征是：所述醋酸铵水溶液的浓度为10mM，流速为0.3mL/min，柱温35℃，进样量3微升。

6.如权利要求1所述的分析方法，其特征是：正谱条件为：分辨率，70000；鞘气流速，40个单位；辅助气流速，10个单位；反吹气流速，0个单位；喷雾电压，3.5kV；毛细管温度，320℃；辅助气温度，350℃；扫描范围，m/z：70-1050；扫描模式：全扫描。

7.一种筛选区别于糖浆的真枣花蜜标志性代谢物的方法，其特征是，包括以下步骤：

对枣花蜜样品与糖浆分别采用有机溶剂进行前处理后，应用权利要求1～6中任一项所述的超高效液相色谱-四极杆-轨道阱高分辨质谱方法实现对前处理后的样品中的化学成分的分离与测定，然后对得到枣花蜜样品与糖浆的UHPLC-MS原始数据进行预处理，最后应用多元统计分析方法主成分分析模型进行差异化合物筛选，确定和鉴定标志性代谢物；

在获得载荷图时，通过设定Ratio＞20或＜0.5，P值＜0.01，来筛选潜在的标志性代谢物。