[发明专利]一种高效的转座突变系统及构建方法有效
| 申请号： | 201710270598.X | 申请日： | 2017-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN108728477B | 公开（公告）日： | 2022-02-22 |
| 发明（设计）人： | 周勉;朱锦祥;朱巧云;张元兴 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/54;C12N1/19 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 突变 系统 构建 方法 | ||
1.一种双质粒转座突变系统，其特征在于，以酵母细胞为宿主细胞，包括：
(1)转座酶表达盒，其整合于酵母细胞的基因组上；所述的转座酶包括选自下组的转座酶：TcBaseCO V596A转座酶，SBase100X转座酶，piggyBac转座酶；和
(2)游离在酵母细胞中的质粒，该质粒包含：转座元件；且，该质粒不包含酵母可识别的复制位点序列；所述的转座元件包括操作性连接的转座子末端重复区域和筛选标记基因序列；
其中，所述酵母为毕赤酵母。
2.如权利要求1所述的双质粒转座突变系统，其特征在于，所述的转座酶表达盒包括：启动子，转座酶编码基因和终止子。
3.如权利要求2所述的双质粒转座突变系统，其特征在于，所述的启动子选自：诱导型或阻遏型启动子。
4.如权利要求3所述的双质粒转座突变系统，其特征在于，所述的启动子是阻遏型启动子，包括选自下组的启动子：硫胺素阻遏型启动子PpTHI11p或甲硫氨酸阻遏型启动子PpMET3p。
5.如权利要求3所述的双质粒转座突变系统，其特征在于，所述的启动子是诱导型启动子，包括启动子：甲醇诱导型启动子PpAOX1p。
6.如权利要求1所述的双质粒转座突变系统，其特征在于，所述的转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。
7.如权利要求1所述的双质粒转座突变系统，其特征在于，所述的转座酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。
8.如权利要求1所述的双质粒转座突变系统，其特征在于，所述的转座子末端重复区域包括选自下组的转座子末端重复区域：TcBL/TcBR，SBL/SBR。
9.如权利要求8所述的双质粒转座突变系统，其特征在于，所述的筛选标记包括选自下组的筛选标记：HIS4，博来霉素抗性基因ZeocinR，G-418抗性基因kanR。
10.用于构建权利要求1所述的双质粒转座突变系统的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包括：
(1)助质粒，其中包括转座酶编码基因，其整合于酵母细胞的基因组上；所述的转座酶包括选自下组的转座酶：TcBaseCO V596A转座酶，SBase100X转座酶，piggyBac转座酶；和
(2)游离质粒，该质粒包含：转座元件；且，该质粒不包含酵母可识别的复制位点序列；所述的转座元件包括操作性连接的转座子末端重复区域和筛选标记基因序列；
其中，所述酵母为毕赤酵母。
11.权利要求1-9任一所述的双质粒转座突变系统的用途，用于进行基因突变，获得突变的基因。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华东理工大学，未经华东理工大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710270598.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
