[发明专利]盐生草抗旱基因Hg.S4及其应用

权利要求书

1.一种盐生草抗旱基因Hg.S4，其特征在于从盐生草叶片中分离到Hg.S4基因cDNA的核苷酸序列如下，大小为619bp；

2.如权利要求1所述的盐生草抗旱基因Hg.S4，其特征在于所述的盐生草抗旱基因Hg.S4的编码序列为权利要求1中第228位至第341位，所述的核苷酸序列如下，大小为114bp：

3.如权利要求2所述的盐生草抗旱基因Hg.S4，其特征在于所述的盐生草抗旱基因Hg.S4的编码序列的蛋白质氨基酸序列，由37个氨基酸组成：

4.如权利要求1所述的盐生草抗旱基因Hg.S4，其特征在于特异引物为：

Hg.S4-F1 5’-ACCCCCATACTCTCGTAACCCTATA-3’

Hg.S4-R1 5’-AGTCGAAACATACTTCCCATTAAAG-3’。

5.如权利要求1所述的盐生草抗旱基因Hg.S4的制备方法，其特征在于步骤为：

以200-500mM NaCl胁迫处理3-7d盐生草幼苗的叶片为材料，Trizol法提取总RNA，采用cDNA合成试剂盒，反转录合成cDNA第一链，扩增该基因片段，PCR反应体系为dNTP Mixture2.5mM2 ul，10×Ex Taq Buffer Mg²⁺Plus 2.5ul，上游引物5’-ACCCCCATACTCTCGTAACCCTATA-3’10μM 1ul，下游引物5’-AGTCGAAACATACTTCCCATTAAAG-3’10μM 1ul，cDNA 1ul，Ex Taq酶5U/ul 0.2ul，ddH₂O 17.3ul，总体积25ul；

扩增程序为94℃ 4min，94℃ 50s，59.0-59.5℃ 30s，72℃ 25s，共32-35个循环，72℃延伸7-8min；利用胶回收试剂盒回收PCR产物，接着将回收产物与pMD19-T载体连接，得到重组质粒pMD19-Hg.S4，转化大肠杆菌感受态细胞，筛选蓝白斑并测序。