[发明专利]一种山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代的分子鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于植物种间杂交品种的鉴定，具体涉及一种山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代的分子鉴定方法。

背景技术

中国是世界猕猴桃资源的起源中心，其遗传资源极为丰富，占全世界猕猴桃遗传资源种属总数的96％。目前，商业开发利用价值较高的主要是中华猕猴桃原变种和中华猕猴桃美味猕猴桃变种、少量的毛花猕猴桃和软枣猕猴桃，因此猕猴桃遗传基础单一和消费群体对高品质猕猴桃需求的矛盾日益突出。种间杂交能聚合父母本优异性状，是猕猴桃优良品种创制的有效途径。由中国科学院武汉植物园选育的黄肉“金艳”猕猴桃是由毛花猕猴桃和中华猕猴桃杂交获得，作为第一个商业化种间杂交猕猴桃品种，“金艳”猕猴桃以其独特的风味和超长贮藏性深受消费者青睐。山梨猕猴桃抗寒、抗病、耐储性好，且果柄基部不生成离层，具有越冬不落果的特性；而中华猕猴桃果实风味佳、适应性强，且耐高温干旱。在山梨猕猴桃和中华猕猴桃的种间杂交后代中，已经筛选到抗病性强且风味优良的优株系，种间杂交的优异资源能有效解决遗传背景狭小的问题，利于优质猕猴桃品种的创新培育。

研究猕猴桃种间杂交的分子鉴定技术，对资源的深度评价以及加速植物品种创新具有重要意义。分子标记因其稳定、不受表型及环境变异影响，已成为新品种特异性、一致性及稳定性(即DUS测试)测试的重要手段。利用AFLP和SSR标记等多种分子标记的方法，对油菜、玉米和水稻等多种作物成功地进行了DUS补充测试。随着第二代测序技术的发展，目前单核苷酸多态性(SNP)标记已广泛应用于遗传多样性分析、品种鉴定、遗传连锁图谱构建和重要农艺性状的定位等相关研究中。最近，利用SNP标记在大麦中成功进行材料鉴定，为猕猴桃进行分子鉴定提供了重要的示例。

本发明选择山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交后代为研究对象，拟开发出一套基于测序和生物信息学手段的鉴定猕猴桃种间杂交特征的分子鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一组用于鉴定山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代的引物，包括12对引物，该组引物分布于猕猴桃不同染色体上，引物扩增序列包含山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代的特有杂合位点。

本发明的再一个目的在于提供一种鉴定山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代的方法，利用SNP位点鉴定杂交子代，重复性好，稳定性高。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一组用于鉴定山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代的引物，包括12对引物，引物序列见表1。

一种用于鉴定山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代的方法，其步骤是：

1、提取待测猕猴桃的基因组DNA；

2、利用表1所示的12对引物，分别对待测猕猴桃的基因组DNA进行PCR扩增测序；

3、利用SNP位点鉴定山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代：第1对引物扩增的分子标记的第81位碱基为A或T，第2对引物扩增的分子标记的第72位碱基为T或A，第3对引物扩增的分子标记的第119位碱基为A或T，第4对引物扩增的分子标记的第94位碱基为T或C，第5对引物扩增的分子标记的第95位碱基为T或A，第6对引物扩增的分子标记的第108位碱基为T或C，第7对引物扩增的分子标记的第109位碱基为G或C，第8对引物扩增的分子标记的第111位碱基为T或C，第9对引物扩增的分子标记的第122位碱基为T或A，第10对引物扩增的分子标记的第74位碱基为T或C，第11对引物扩增的分子标记的第108位碱基为A或T，第12对引物扩增的分子标记的第72位碱基为A或T，则待测猕猴桃为山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代。

与现有技术相比，本发明具有下列优点和积极效果：

1、传统的植物分类及杂交子代鉴定主要依靠表型特征，随着分子生物学的飞速发展，本发明通过12个分布在不同染色体上的SNP位点对山梨猕猴桃和中华猕猴桃杂交子代进行分子水平的鉴定。本发明通过一组特异的位点来鉴定杂交子代，不受表型和环境因素的影响，鉴定准确率高，重复性好。

2、本发明开发出一种适用猕猴桃种间杂交品种的分子鉴定方法，经实验证明此套分子鉴定方法具有重复性好、稳定性高的特点。本发明基于第二代测序技术，分子标记分布于不同染色体上，在分子水平对种间杂交子代进行鉴定。

具体实施方式

实施例1：山梨猕猴桃和中华猕猴桃种间杂交子代SNP分子标记的获得