[发明专利]一种靶向筛选外源基因双整合位点提高人C5单抗表达产量的方法在审
| 申请号： | 201710277251.8 | 申请日： | 2017-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN108727494A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 高小平;张晟;代燕平;何刚;程琳;王雯茜;付伟 | 申请（专利权）人： | 成都贝爱特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C12N15/13;C12N15/85 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610041 四川省成都市高新区*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重链编码基因 整合 外源基因 筛选 靶向 单抗 位点 仓鼠 真核表达载体 单克隆抗体 细胞 转录 编码质粒 技术筛选 稳定表达 细胞克隆 共转染 人补体 染色体 抗体 可用 重链 升高 疾病 治疗 | ||
【权利要求书】：
1.一种靶向筛选双整合位点提高人补体C5单克隆抗体表达产量的方法，其特征在于，所述靶向筛选的双整合位点是位于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞1号染色体长臂。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶向筛选的双整合位点是染色体1q1和1q13区。
3.权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将人C5抗体的轻、重链编码基因(如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)分别插入真核表达载体，制备轻、重链重组表达质粒；
(2)将步骤(1)获得的轻、重链重组表达质粒共转染至CHO细胞，经MTX加压和半固体培养筛选，制备单克隆细胞；
(3)采用荧光原位杂交(FISH)技术分析轻、重链编码基因在单克隆细胞染色体的整合位点；
(4)筛选轻、重链基因双整合位点位于1q1和1q 13区的单克隆细胞。
4.权利要求3(1)所述的真核表达载体，其包含“泛染色质开放元件”(UCOE)和人C5抗体的轻、重链编码基因。
5.权利要求3(2)所述的CHO细胞为DG44细胞。
6.权利要求3(4)所述的单克隆细胞，包含人C5抗体轻、重链编码基因在1q1和1q 13区的双整合位点。
7.权利要求6所述的单克隆细胞，可用于表达人C5单克隆抗体。
8.权利要求7所述的人C5单克隆抗体，可用于治疗因C5水平升高而受累的各种疾病。
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