[发明专利]一种肺炎球菌缀合疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种肺炎球菌缀合疫苗，其特征在于：所述肺炎球菌缀合疫苗为多价肺炎球菌多糖与两种载体蛋白经连接体分别与磁性纳米微球经偶联而成的肺炎球菌缀合疫苗，其中，连接体为磁性纳米微球，所述磁性纳米微球的磁性微粒位于磁性纳米微球的内部为核，高分子材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)包裹于磁性微粒的外部，磁性微粒为Fe₃O₄，磁性纳米微球粒径为0.1-10μm，载体蛋白中有一种为嗜血流感杆菌表面蛋白HiD或肺炎球菌表面蛋白A，另一种载体蛋白为重组人轮状病毒蛋白P基因型轮状病毒蛋白。

2.根据权利要求1所述的肺炎球菌缀合疫苗，其特征在于：多价肺炎球菌多糖为多种肺炎球菌荚膜多糖。

3.根据权利要求1所述的肺炎球菌缀合疫苗，其特征在于：多价肺炎球菌多糖为多种分离提纯血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜多糖，所述血清型肺炎球菌的血清型包括1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和/或33F。

4.根据权利要求1所述的肺炎球菌缀合疫苗，其特征在于：多价肺炎球菌多糖与两种载体蛋白的质量比为(0.5～2)：1。

5.根据权利要求1～4任一项所述的肺炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

a)分别分离提纯多种血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜多糖；

b)分别制备并分离提纯所选用的多种载体蛋白；

c)分别将各种荚膜多糖与磁性纳米微球偶联成多糖-磁性纳米微球偶联体；

d)再将多糖-磁性纳米微球偶联体分别与多种载体蛋白偶联结合；

e)分离纯化步骤；

d)所得偶联体成所述肺炎球菌缀合疫苗原液。

6.根据权利要求5所述的肺炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

a)分别分离提纯多种血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜多糖；

b)分别分离提纯所选用的多种载体蛋白；

c)分别将各种荚膜多糖与磁性纳米微球偶联成多糖-磁性纳米微球偶联体，再经化学改性，从而将所述多糖-磁性纳米微球偶联体表面未与多糖反应的-OH改性为-CHO；

d)再将多糖-磁性纳米微球偶联体分别与多种载体蛋白偶联结合；

e)分离纯化步骤；

d)所得偶联体成所述肺炎球菌缀合疫苗原液。

7.根据权利要求5所述的肺炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于：还包括制备磁性纳米微球，包括先制备纳米磁性粒子，再制备磁性纳米微球的过程；其中纳米磁性粒子可通过化学共沉淀法、水热法或溶胶法、热解法制备，磁性纳米微球可通过包埋法、单体聚合法或原位法制备。

8.根据权利要求7所述的肺炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于：采用化学共沉淀法制备纳米磁性粒子，再将纳米磁性粒子与高分子材料经快速膜乳化结合溶剂萃取法和/或包埋法或单体聚合法制备磁性纳米微球。

9.根据权利要求7所述的肺炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于：采用化学共沉淀法制备纳米磁性粒子，再将纳米磁性粒子与高分子材料经快速膜乳化结合溶剂萃取法和/或包埋法制备粒径均一的磁性纳米微球。

10.根据权利要求7所述的肺炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于：其中磁性微粒为Fe₃O₄。

11.根据权利要求6所述的肺炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于：步骤c的具体操作为：在偶联介质反应缓冲液中，室温下、pH4.0-9.0下，将步骤a所得多糖与磁性纳米微球共反应6-24小时得多糖-磁性纳米微球偶联体，再通过25％戊二醛对其进行进一步改性，使得多糖-磁性纳米微球偶联体表面未与多糖反应的-OH改性为-CHO。