[发明专利]一种6-苄氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法

权利要求书

1.一种6-苄氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法，其特征在于采用由6-氯嘌呤和4-（氨甲基）苯甲酸取代得到的产物作为半抗原，以下简称为6-BA，再用碳二亚胺法将半抗原6-BA与载体蛋白偶联，即得到6-苄氨基腺嘌呤的人工抗原；步骤为：

（1）半抗原6-BA的合成：

合成路线如下：

称取化合物1 6-氯嘌呤2.00 g和三乙胺 2.60 g，溶解于20 mL的叔丁醇中，在N₂的保护下，向该溶液中加入4-（氨甲基）苯甲酸1.96g，回流72h；冷却至室温，过滤，获得2.10 g 黄色固体，即化合物2；

称取化合物2 1.70 g，加入20 mL甲醇溶解，在0℃条件下，向该溶解液中逐滴加入二氯亚砜0.85 mL，然后加热至室温，搅拌过夜；将反应液减压浓缩，并通过硅胶柱纯化，最终获得白色固体108 mg，即化合物3；

用3mL 6M HCl 溶液溶解300mg化合物3，在80℃条件下搅拌过夜，减压浓缩除去溶剂，获得白色固体140 mg，即半抗原6-BA；

（2）完全抗原6-BA-BSA的制备：采用碳二亚胺法将步骤（1）获得的半抗原6-BA与牛血清白蛋白BSA偶联，得到偶联物完全抗原6-BA-BSA。

2.如权利要求1所述6-苄氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法，其特征在于：步骤（2）所述完全抗原6-BA-BSA的制备方法如下：

a、称取半抗原6-BA 2.5mg， N-羟基琥珀酰亚胺NHS 3mg，溶解于300 μL N,N-二甲基甲酰胺DMF中，室温搅拌反应10min；再称取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC5.5mg，用100 μL DMF充分溶解后，加入到上述6-BA溶液中，室温搅拌反应6～8 h，称为A液；以6-BA与牛血清白蛋白BSA摩尔比为60︰1计，取10 mg BSA，用pH=8.6、2mL 0.01M硼酸盐缓冲溶液BB溶解，称为B液；再逐滴将A液缓慢加入到B液中，室温反应过夜；即得偶联物6-BA-BSA混合液；

b、透析：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将偶联物6-BA-BSA混合液放入透析袋，并用pH=7.2、0.01M磷酸盐缓冲溶液PBS透析3天，每天换3次透析液，除去未反应的小分子半抗原，得到完全抗原6-BA-BSA，并通过紫外吸收扫描方法进行鉴定。