[发明专利]一种葡萄糖氧化酶CnGODA及其基因与应用

说明书

本发明涉及基因工程领域。具体地，本发明涉及一种葡萄糖氧化酶CnGODA及其基因与应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示，该葡萄糖氧化酶具有良好的性质，可作应用于饲料、食品、医药等工业。根据本发明的技术方案可以实现利用基因工程手段生产性质优良适合工业应用的葡萄糖氧化酶。

技术领域

本发明涉及基因工程领域。具体地，本发明涉及一种葡萄糖氧化酶CnGODA及其基因与应用。

背景技术

葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)一种黄素依赖型的需氧脱氢酶，能够在有氧环境下专一性的氧化β-D-葡萄糖，生成葡萄糖酸和过氧化氢。葡萄糖氧化酶广泛地分布于动物、植物和微生物中，由于微生物具有生长繁殖速度快，来源广等特点使之成为葡萄糖氧化酶的主要来源。

葡萄糖氧化酶作为饲料添加剂之一，具有巨大的潜在应用价值。另外，葡萄糖氧化酶还具有广泛的应用前景，由于其催化专一性和高效性的优点，已应用于食品、饲料、医药、检测试纸和生物传感器等领域。

发明内容

本发明的目的是提供一种新来源的葡萄糖氧化酶。

本发明的再一目的是提供上述葡萄糖氧化酶的基因。

本发明的再一目的是提供包含上述葡萄糖氧化酶基因的重组载体。

本发明的再一目的是提供包含上述葡萄糖氧化酶基因的重组菌株。

本发明的再一目的是提供一种制备葡萄糖氧化酶的方法。

本发明的再一目的是提供上述葡萄糖氧化酶的应用。

本发明首先所要解决的问题是克服现有技术的不足，并提供一种性质优良的、适合于在饲料、食品、医药等行业中应用的新的葡萄糖氧化酶。该葡萄糖氧化酶CnGODA，NCBI序列比对结果显示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1：

其中，该酶全长614个氨基酸，N端17个氨基酸为信号肽序列“MHSIHFLAAFLAAVSEA”。因此，成熟的葡萄糖氧化酶GOD的理论分子量为64.733kDa，其氨基酸序列如SEQID NO.2：

该葡萄糖氧化酶最适pH为7.0，在pH6.0-pH10.0范围内，该酶能够维持其70％以上的酶活力；最适温度30℃，在15℃-50℃范围内能够维持50％以上的酶活力，具有较良好的温度稳定性。

本发明通过PCR的方法克隆了这个葡萄糖氧化酶基因CngodA，结果表明，葡萄糖氧化酶cDNA全长1842bp，其cDNA序列如SEQ ID NO.3示：

其中，信号肽的碱基序列为：

“ATGCATTCGA TTCATTTCCT AGCTGCTTTC CTGGCTGCAG TCTCTGAAGC T”

因此，成熟基因的编码序列为SEQ ID NO.4示：

成熟蛋白理论分子量为64.733kDa，该酶属于葡萄糖/甲醇/胆碱氧化还原酶家族。将葡萄糖氧化酶基因CngodAcDNA序列及其氨基酸序列在GenBank中进行BLAST比对，确定CnGODA是一种新的葡萄糖氧化酶。