[发明专利]一种反应型巯基化合物探针及其制备方法

说明书

本发明公开了一种反应型巯基化合物探针及其制备方法，基于硫醇参与的二硫键断裂反应，传感分子释放出罗丹明染料分子单体，荧光强度显著性增强并伴随明显的颜色变化，选取的干扰离等对检测效果几乎无影响，因而实现了对巯基化合物的特异性识别响应，检测限达0.124μM。

技术领域

本发明属于有机合成技术领域，具体涉及一种反应型巯基化合物探针及其制备方法。

背景技术

生物体内许多蛋白质和小分子中都含有巯基，如谷胱甘肽(GSH)、半胱氨酸(Cys)和高半胱氨酸(Hcy)。巯基在生物体内细胞的抗氧化系统中具有极其重要的作用，它可以防止生物体内细胞受到氧化伤害。医学研究表明谷胱甘肽及半胱氨酸与很多疾病有关，比如肾功能衰竭、老年痴呆症等，它们在生物体内的含量变化可以作为这些疾病诊断的依据，因此开发选择性地检测半胱氨酸的检测方法尤其重要。

目前测定氨基酸含量的方法有很多，如比色法、碘量法、酶循环法、毛细管电泳法和HPLC法等，这些方法各有优点，但也都有不足之处。比色法是以生成有色化合物的显色反应为基础的，一般包括两个步骤：首先是选择适当的显色试剂与待测组分反应，形成有色化合物，然后再比较或测量有色化合物的颜色深度，在此过程中，溶液的酸度、显色剂的用量、温度、溶剂等对显色反应都有影响，测量的灵敏度和准确度较差；碘量法是氧化还原滴定法中，应用比较广泛的一种方法，但对样品溶液的酸度和温度反应敏感，不易操作；酶循环法是利用酶的底物特异性来放大被测物质的测定方法，但使用的工具酶用量大，成本较高；毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法，毛细管直径小，使光路太短，灵敏度较低，而且电渗会因样品组成而变化，进而影响分离重现性；HPLC法准确性高，样品处理简单，但受色谱柱局限，且耗费时间很长。

在这些检测方法中，荧光探针法因其探针特殊的光物理特性和光化学特性，不仅可以有效地提高检测的灵敏度，而且具有动态响应范围广的特点，更重要的是可以检测活体甚至单个活细胞中的巯基含量，从而成为了目前广泛应用的检测生物体内巯基的一种重要的手段。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种反应型巯基化合物探针，还提供了该反应型巯基化合物探针的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种反应型巯基化合物探针，探针分子式为C₃₉H₂₅NO₅S₂，结构式如下：

上述反应型巯基化合物探针的制备方法，包括以下步骤：

(1)间苯二酚与邻苯二甲酸酐反应得到化合物1，化合物1的结构式如下：

(2)化合物1与苊酚反应得到化合物2，化合物2的结构式如下：

(3)化合物2与化合物3反应得到目标产物反应型巯基化合物探针，化合物3的化学式如下：

优选地，步骤(2)中苊酚的制备方法包括以下步骤：

1)向苊中依次加入三氯氧磷及N，N-二甲基甲酰胺，搅拌混匀后升温至90～95℃，继续搅拌2.5～3.5小时，得到反应液；将反应液加入冰水混合物中，生成粘稠固体，经抽滤及真空干燥，得到5-苊醛粗品；其中，苊、三氯氧磷及N，N-二甲基甲酰胺的摩尔比为1：2～2.5：5～6，冰水混合物的体积为反应液体积的10～20倍；

2)将步骤1)所得5-苊醛粗品采用柱色谱分离，真空干燥，得到5-苊醛纯品；其中，柱色谱分离时洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝38～42：1；