[发明专利]一种快速高效的白桦转基因方法

权利要求书

1.一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：

一、选取苗高为5～6cm的白桦组培苗，在超净工作台中将外植体叶片和茎段置于愈伤诱导培养基中，诱导培养7～10天；

二、将步骤一在愈伤诱导培养基中生长的愈伤组织取出，转移至含目的基因序列的根癌农杆菌侵染液中，用真空泵中抽真空5～10min后，置于共培养的培养基上，黑暗处理48h；其中，侵染液OD₆₀₀为0.6～0.8，

三、将步骤二黑暗处理后的愈伤组织置于加入抑菌剂的转基因抗性筛选培养基上于25℃光照条件下进行筛选培养40～50天，得到白桦抗性苗；

四、将步骤三的白桦抗性苗转移到加选择剂和抑菌剂的生根培养基中培养37～42天后，进行分子检测验证，检测验证正确后，即表明获得转基因白桦苗。

2.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于步骤一中所述的生根培养基含WPM、0.2mg/L的NAA、30g/L的蔗糖和3.0mg/L Phytagel，pH＝5.8。

3.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于步骤一中所述的愈伤诱导培养基含WPM、0.8mg/L的6-BA、0.5mg/L的GA₃、0.02mg/L的NAA、30g/L的蔗糖和3.0mg/L的Phytagel，pH＝5.8。

4.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于步骤二中所述的共培养的培养基含WPM、1.0mg/L的6-BA、30g/L的蔗糖和3.0mg/L的Phytagel，pH＝5.8。

5.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于步骤二中所述的侵染液含WPM、150μM的As、30g/L的蔗糖，pH＝5.8。

6.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于步骤三中所述的筛选培养基含WPM、1.0mg/L的6-BA、30g/L的蔗糖、3.0mg/L的Phytagel、选择剂和抑制剂，pH＝5.8。

7.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于选择剂为30～50mg/L的卡那霉素，抑制剂为300～500mg/L的氨苄霉素。

8.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于步骤四中所述的生根培养基含WPM、0.2mg/L的NAA、30g/L的蔗糖、3.0mg/L的Phytagel、选择剂和抑制剂，pH＝5.8。

9.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于选择剂为30～50mg/L的卡那霉素，抑制剂为300～500mg/L的氨苄霉素。

10.根据权利要求1所述的一种快速高效的白桦转基因方法，其特征在于步骤四选择的抗性苗株高为1.5～2.0cm。