[发明专利]滇黄精的育苗方法

权利要求书

1.滇黄精的育苗方法，其特征在于，具体方案包括以下步骤：

（1）滇黄精外植体准备：每年春季，将生长旺盛的滇黄精根茎从土中挖出，用毛刷洗去泥土，然后用解剖刀切取带幼芽根茎，用质量比为20%的洗衣粉水溶液浸泡10-15 min，置流水下冲洗30-60 min；冲洗后放到超净工作台上的烧杯中，烧杯中加入质量比为20%维生素C浸泡5-10 min；然后用体积比为75%的乙醇浸泡30 s后，转入质量比为0.1%的氯化汞中消毒5-8 min，无菌水冲洗8-10次，每次不低于3 min，得到滇黄精外植体，备用；

（2）消除褐化培养：将准备好的滇黄金外植体接种于培养基A中，在光照度为1500-2000 lx，光照时间为8 h/d，温度为23 ± 1℃的条件下进行培养，每七天更换新的培养基A继续培养，培养基A的更换次数不少于两次；

培养基A是由每升蒸馏水中加入5000-10000 mg的聚乙烯比格烷酸酮，1.0-3.0 g的活性炭，1.0-10 mg的氯化钠，15000 mg的蔗糖和5300-5500 mg的琼脂粉配制而成，培养基A的PH值在5.4-5.8之间；

（3）愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养：将消除褐化后的滇黄精外植体接入培养基B中，在光照度为1500-2000 lx，光照时间为12 h/d，温度为23 ± 1 ℃的条件下同步进行愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养；培养15 d后滇黄精外植体的芽开始萌发长出叶片，并在基部出现愈伤组织；30 d后愈伤组织表面开始出现不定丛芽；45 d后丛芽分化率可达5.37；

培养基B是由每升蒸馏水中加入 1.5-2.0 mg的玉米素，0.05-0.1 mg的萘乙酸，30000 mg的蔗糖，5300-5500 mg的琼脂配制而成，培养基B的PH值在5.4-5.8之间；

（4）促进根茎生长的暗培养：将诱导出的、健壮的不定芽丛分割为2-3株一丛，转接至新鲜的培养基B中，在无光照、温度控制在18 ± 1℃的条件下进行暗培养，愈伤组织增殖、芽丛生长为丛芽的同时，基部根茎增多，30 d后可获得根茎发达的丛生状白化试管苗；

（5）试管苗复壮培养：将培养基B中根茎发达的白化试管苗带根茎切割为0.5 cm × 0.5 cm大小转入培养基C中；在光照度为1500-2000 lx，光照时间为12 h/d，温度为23 ± 1 ℃的条件下进行培养，培养30 d后小根茎迅速生长，同时丛芽大量繁殖；45 d后可获得生长健壮的试管苗；

培养基C是由每升蒸馏水中加入1.5-2.0 mg的玉米素，0.05-0.1 mg的萘乙酸，5-10 mg的多效唑，30000 mg的蔗糖，5300-5500 mg的琼脂配制而成，培养基C的PH值在5.4-5.8之间；

（6）生根培养：将高为3-4 cm长的试管苗接种于培养基D中，在光照度为1500-2000 lx，光照时间为12 h/d，温度为23 ± 1℃的条件下进行培养，培养45d后获得长势健壮的生根苗；

培养基D是由每升蒸馏水中加入0.5-1.5 mg的萘乙酸，15000 mg的蔗糖，5300-5500 mg的琼脂配制而成，培养基D的PH值在5.4-5.8之间；

（7）将6-8 cm高的生根苗置于室温下炼苗3 d后，从培养基中取出生根苗，清洗干净残留在生根苗上的培养基，放入质量浓度0.1-0.2%的多菌灵溶液（质量比）中消毒2-3 min，假置在沙床上，保持空气湿度90%以上，用70%遮阳网遮阴，30 d后成活率达95%以上；以后每隔10 d喷施1次稀释20倍的MS营养液，30 d后可移栽大田。