[发明专利]一种短双歧杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌三菌复合微粒子的制备方法及应用

说明书

一种短双歧杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌三菌复合微粒子的制备方法及应用，它涉及一种短双歧杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌三菌复合微粒子的制备方法及应用。本发明的目的是为了解决益生菌易受胃液、肠液、胆汁的破坏，使活菌数降低，影响保健效果的问题，本发明方法为：短双歧杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌菌体离心弃上清，沉淀并定容，再加入果胶溶液然后滴入CaCl₂溶液中，得到的湿微粒子，静止固化，过滤，冲洗微粒子表面，然后与冻干保护剂混合均匀，冷冻干燥。本发明可作为降脂产品进行应用。本发明利用果胶包裹益生菌使心材免受贮藏环境及胃液、肠液和胆汁破坏，使活菌经过胃肠道时得到保护。本发明应用于益生菌领域。

技术领域

本发明涉及一种短双歧杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌三菌复合微粒子的制备方法及 应用。

背景技术

双歧杆菌是母乳喂养婴儿肠道中的主要天然菌群，长久以来的研究证明，双歧杆菌对 人体的生理作用远远超过许多菌种。发酵乳杆菌是乳酸杆菌之一，在传统发酵食品中分布 广泛且是生物体内正常菌群。其菌落表面光滑，不透明且形态多呈圆顶状。植物乳杆菌作 为乳杆菌科中的乳酸菌属的一种，广泛存在于传统的发酵制品中，如酸菜、泡菜、熏制红 肠及发酵奶中。其菌落形态多为圆形，表面光滑，外观呈白色或浅黄色。对生物体有多种益生作用，目前在发酵食品领域，工业乳酸生产以及保健品领域都有广泛的应用。有研究表明，植物乳杆菌有抑制肠道内致病菌生长的作用，从而维持肠道菌群平衡，维持机体健康。但这些益生菌易受胃液、肠液、胆汁的破坏，使活菌数降低，影响保健效果。

发明内容

本发明的目的是为了解决益生菌易受胃液、肠液、胆汁的破坏，使活菌数降低，影响 保健效果的问题，提供了一种短双歧杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌三菌复合微粒子的制 备方法及应用。

本发明一种短双歧杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌三菌复合微粒子的制备方法按以下 步骤实现：

一、将活化的植物乳杆菌接种到MRS液体培养基中，在37℃下富集培养48h，得到植物乳杆菌培养液；将活化的发酵乳杆菌接种到MRS液体培养基中，在厌氧条件37℃下富 集培养24h，得到发酵乳杆菌培养液；将活化的短双歧杆菌接种到MRS+L-半胱氨酸盐酸盐 的液体培养基中，在厌氧条件37℃下富集培养48h，得到短双歧杆菌培养液；将得到的三 种菌种培养液分别离心、去上清，得到短双歧杆菌的菌体沉淀、发酵乳杆菌的菌体沉淀和 植物乳杆菌的菌体沉淀；

二、将短双歧杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌的菌体沉淀等质量混合，然后用无菌生 理盐水定容至5mL，得到复合浓缩菌液；

三、将果胶溶液等体积加入到复合浓缩菌液中，并在漩涡振荡器上振荡至混合均匀， 得到混合液；用注射器吸取混合液，通过针头将混合液滴入浓度为100-500mmol/L的无菌 CaCl₂溶液中，得到湿的微粒子；

四、将湿的微粒子置于4℃冰箱静止固化0.5-4h，然后过滤，再用无菌水冲洗胶囊表面， 得到冲洗后的微粒子；

五、将冲洗后的微粒子与冻干保护剂按照质量体积比为(1-5)g:(1-8)mL的比例混合均 匀，然后放入-20℃的冰箱预冻2h，再用真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，制得短双歧杆菌、 发酵乳杆菌和植物乳杆菌三菌复合微粒子。

本发明的有益效果：本发明利用果胶包裹益生菌使心材免受贮藏环境及胃液、肠液和 胆汁破坏，使微粒子中包埋的活菌经过胃肠道时得到保护，从而可以顺利到达肠道，尤其 是结肠。将益生菌研制成微粒子可以增加益生菌的贮藏稳定性，还可为厌氧菌株阻隔外界 的高氧环境；并且以低甲氧基果胶作为微粒子壁材，对三菌复合混菌都有很好的包埋效果， 微粒子的包埋率达99％以上。本发明所得三菌复合微粒子贮藏一段时间以后，其中的活 菌数要明显的高于裸菌菌粉对照，可见益生菌微粒子可以显著地提高产品中的活菌数量， 且三菌复合微粒子相对单一菌株微粒子减重效果更加显著。

附图说明