[发明专利]一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法

权利要求书

1.一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

步骤S1：制备辣根过氧化物酶催化的鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，用BPCL微弱化学发光测量仪测定该体系的化学发光信号，得到第一发光强度；

步骤S2：将不同浓度的硫化氢分别和辣根过氧化物酶混合，然后分别加入到鲁米诺-过氧化氢化学发光体系内，用BPCL微弱化学发光测量仪测定各体系的化学发光信号，得到不同浓度硫化氢下体系的发光强度并结合第一发光强度，绘制标准曲线；

步骤S3：将待测样品和辣根过氧化物酶混合，然后加入到鲁米诺-过氧化氢化学发光体系内，用BPCL微弱化学发光测量仪测定该体系的化学发光信号，得到第二发光强度并结合标准曲线，实现待测样品中硫化氢浓度的检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法，其特征在于：所述步骤S1具体如下：

步骤S1-1：将辣根过氧化物酶溶液与过氧化氢溶液混合，室温反应数分钟，得到第一溶液；

步骤S1-2：将鲁米诺溶液添加到pH为7.0的Tris-HCl缓冲液中，得到第二溶液；

步骤S1-3：将第一溶液与第二溶液混合，得到辣根过氧化物酶催化的鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，立即用BPCL微弱化学发光测量仪测定体系的化学发光信号，得到第一发光强度。

3.根据权利要求1所述的一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法，其特征在于：所述步骤S2具体如下：

步骤S2-1：将不同浓度的硫化氢分别与辣根过氧化物酶溶液混合，室温反应数分钟，然后再与过氧化氢溶液混合，室温反应数分钟，得到第一溶液；

步骤S2-2：将鲁米诺溶液添加到pH为7.0的Tris-HCl缓冲液中，得到第二溶液；

步骤S2-3：将第一溶液与第二溶液混合，立即用BPCL微弱化学发光测量仪测定各体系的化学发光信号，得到不同浓度硫化氢下体系的发光强度并结合第一发光强度，绘制标准曲线。

4.根据权利要求1所述的一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法，其特征在于：所述步骤S3具体如下：

步骤S3-1：将待测样品与辣根过氧化物酶溶液混合，室温反应数分钟，然后再与过氧化氢溶液混合，室温反应数分钟，得到第一溶液；

步骤S3-2：将鲁米诺溶液添加到pH为7.0的Tris-HCl缓冲液中，得到第二溶液；

步骤S3-3：将第一溶液与第二溶液混合，立即用BPCL微弱化学发光测量仪测定体系的化学发光信号，得到第二发光强度并结合标准曲线，实现待测样品中硫化氢浓度的检测。

5. 根据权利要求2-4之一所述的一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法，其特征在于：所述辣根过氧化物酶的浓度为4-6 µg/mL， H₂O₂溶液的浓度为3-5 mM，辣根过氧化物酶与H₂O₂的体积比为1-2:5；

所述鲁米诺溶液的浓度为5-7 mM，Tris-HCl缓冲液的浓度为18-22 mM，鲁米诺溶液与Tris-HCl缓冲液的体积比为1-2:8；

所述辣根过氧化物酶与鲁米诺溶液的体积比为1-2:5。

6. 根据权利要求5所述的一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法，其特征在于：所述辣根过氧化物酶的浓度为5 µg/mL，辣根过氧化物酶用量为20 µL，所述H₂O₂的浓度为4mM，H₂O₂的用量为50 µL；

所述鲁米诺溶液的浓度为6 mM，鲁米诺溶液用量为100 µL，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为20 mM，Tris-HCl缓冲液的用量为100 µL。