[发明专利]感光嵌合GPCR蛋白

权利要求书

1.适于使光信号与内视网膜ON双极细胞中的mGluR6的信号转导级联偶联的嵌合GPCR蛋白，其包含来源于G蛋白偶联受体(GPCR)蛋白家族的至少两个成员的结构域，其特征在于至少两个成员的第一个是促成其介导光激活的结构域中至少一些的感光GPCR，以及至少两个GPCR家族成员的第二个促成其能够使光激活与mGluR6的信号转导级联偶联的结构域中的至少一些。

2.权利要求1的嵌合GPCR蛋白，其中所述第一GPCR成员来源于双稳态感光色素。

3.权利要求1或2的嵌合GPCR蛋白，其中所述第一GPCR成员至少促成含有形成席夫碱以使生色团与GPCR共价结合的氨基酸残基的结构域或促成在生理学对应物中形成生色团结合袋的所有结构域。

4.权利要求1-3中任一项的嵌合GPCR蛋白，其中所述第一GPCR成员是黑视蛋白，优选人黑视蛋白。

5.权利要求4的嵌合GPCR蛋白，其中所述黑视蛋白、特别是人黑视蛋白促成生色团结合袋，特别包含至少包括氨基酸序列Y149-K321的跨膜结构域TM3-TM7。

6.权利要求4的嵌合GPCR蛋白，其中所述黑视蛋白、特别是人黑视蛋白促成TM3-TM7和胞外环1-3 (EL1、EL2、EL3)及胞外N端，且其中mGluR6促成胞内环1 (IL1)、胞内环2 (IL2)、胞内环3 (IL3)和C端的至少一个。

7.权利要求1或5的嵌合GPCR蛋白，其中所述第一GPCR成员促成跨膜结构域TM1-TM7和胞外环1-3 (EL1、EL2、EL3)及胞外N端，并任选另外促成胞内结构域胞内环1 (IL1)、胞内环2 (IL2)、胞内环3 (IL3)和C端的至少一个而不是所有。

8.权利要求1-7中任一项的嵌合GPCR，其中所述第二GPCR成员促成来源于人mGluR6的胞内结构域的至少一个。

9.权利要求8的嵌合GPCR，其中所述来自mGluR6的至少一个胞内结构域包含mGluR6的第三胞内环和优选另外的第二胞内环，最优选第三胞内环、第二胞内环和C端。

10.具有氨基酸序列编号1.2、2.2、3.2、4.2和5.2的嵌合GPCR蛋白，其包括具有保守氨基酸和核苷酸取代的序列。

11.携带编码权利要求1-10中任一项的嵌合蛋白的遗传信息的核酸。

12.序列编号1、3、5、7和9的核酸，其包括编码相同氨基酸序列和具有保守取代的氨基酸序列的序列。

13.携带编码权利要求1-10中任一项的嵌合蛋白的遗传信息或权利要求11或12的核酸的载体。

14.权利要求13的载体，其中所述载体是病毒载体，优选rAAV。

15.权利要求13或14的载体，其包含控制编码权利要求1-10中任一项的嵌合蛋白的遗传信息的表达、只在ON-双极细胞中表达的视网膜蛋白质的启动子/增强子序列。

16.权利要求15的载体，其中所述启动子/增强子序列来源于Gγ13或TRPM1或mGluR6或夜盲蛋白的启动子/增强子序列。

17.在ON-双极细胞中含有嵌合体的转基因敲入小鼠。

18.在ON-双极细胞中含有嵌合体的转基因斑马鱼。

19.药物、载体或转基因细胞系，特别是转基因神经细胞系，所述细胞系包括包含权利要求11-16中任一项的遗传信息或表达权利要求1-10中任一项的嵌合GPCR蛋白的视网膜细胞系、内视网膜细胞系和双极细胞系以改善视力。

20.将权利要求11-16中任一项的遗传信息体内引入眼中、特别是引入包括双极细胞、特别是ON-双极细胞在内的视网膜细胞中或者体外引入权利要求19的细胞培养物细胞系中的方法。

21.将权利要求11-16中任一项的遗传信息引入眼中、特别是引入眼的玻璃体中或视网膜下间隙以靶向ON-双极细胞用于电穿孔或病毒转导的引入方法。

22.权利要求1-10中任一项的嵌合GPCR蛋白或权利要求11-16中任一项的编码所述嵌合GPCR蛋白的遗传信息和包含所述蛋白质或遗传信息本身或者载体或细胞内的所述蛋白质或遗传信息的组合物，其用于医学疗法以改善视力、特别用于部分或完全失明的治疗、用于色素性视网膜炎(RP)、黄斑变性和其它形式的光感受器变性的治疗。