[发明专利]一种制备L-丙氨酸的方法

权利要求书

1.一种制备L-丙氨酸的方法，其特征在于，在利用葡萄糖浓度为120-125g/L的葡萄糖培养基对德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108进行培养的过程中，向所述葡萄糖培养基中接种6%的种子液，进行发酵，当发酵液中残糖含量为38.7-45g/L时，向发酵液中补加与接种时的种子液相同的新鲜种子液，所述新鲜种子液OD值为5.36-8.0，补加的新鲜种子液的体积占补加后发酵液总体积的2.5%-3.0%继续培养至发酵结束；

所述德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108菌种为：Lds.0108，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO：M2013361。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每升所述葡萄糖培养基中，包括葡萄糖120-125g，Na₂HPO₄·12H₂O 20g，KH₂PO₄ 2.0g，NaCl 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，微量无机盐溶液10ml，余量为纯化水；

所述微量无机盐溶液中：FeCl₃·6H₂O 2.5g/L，CoCl₂·6H₂O 0.2g/L，CuCl₂·2H₂O0.1g/L，ZnCl₂ 0.2g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.3g/L，H₃BO₃ 0.1g/L，MnCl₂·4H₂O 0.5g/L，纯化水余量。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养条件为：温度：30℃；通风量：0m³/h，压力：0.04MPa-0.06MPa； pH：6.5-7.0。

4.根据权利要求1~3任一项所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）制备德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液；

2）向所述葡萄糖培养基中接种体积分数为6%的所述种子液进行发酵培养；

3）当发酵液中葡萄糖的浓度为38.7-45g/Lg/L时，向发酵液中补加与种子液浓度相同的新鲜种子液，继续培养至发酵结束。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述种子液的制备包括如下步骤：

1）在无菌条件下，将菌种接种到LB斜面培养基上，在30℃条件下恒温培养18h；

2）在无菌条件下，用无菌生理盐水将斜面上的菌体洗下，制成菌悬液；

3）将所述菌悬液接种到灭菌后的液体LB培养基中，发酵条件为：温度：30℃；空气流量：2L/min，罐压0.04-0.06MPa；培养至OD值为5.24-8.0。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、制备德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108种子液；

1）在无菌条件下，将菌种接种到LB斜面培养基上，在30℃条件下恒温培养18h；

2）在无菌条件下，用无菌生理盐水将斜面上的菌体洗下，制成菌悬液；

3）将菌悬液接种到灭菌后的液体LB培养基中，发酵条件为：温度：30℃；空气流量：2L/min，罐压0.04-0.06MPa；培养至OD值为5.24-8.0；

B、德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108的培养

向葡萄糖培养基中接种6%的所述种子液，在温度：30℃；通风量：0m³/h，压力：0.04MPa-0.06MPa；液氨控制pH：6.5-7.0的条件下进行发酵；

所述新鲜培养基的组成为每升所述葡萄糖培养基中，包括葡萄糖120-125g，Na₂HPO₄·12H₂O 20g，KH₂PO₄ 2.0g，NaCl 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，微量无机盐溶液10ml，余量为纯化水；

所述微量无机盐溶液中：FeCl₃·6H₂O 2.5g/L，CoCl₂·6H₂O 0.2g/L，CuCl₂·2H₂O0.1g/L，ZnCl₂ 0.2g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.3g/L，H₃BO₃ 0.1g/L，MnCl₂·4H₂O 0.5g/L，纯化水余量；

C、补充新鲜种子液

当发酵液中葡萄糖的浓度为38.7-45g/L时，向发酵液中补加与种子液浓度相同的新鲜种子液，至补加的新鲜种子液的体积占补加后发酵液总体积的2.5%-3.0%，继续培养至发酵结束。