[发明专利]一种间充质干细胞无血清培养基

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞无血清培养基，包含基础培养基和添加在基础培养基中的添加成分，所述添加成分包括L‑谷氨酰胺、非必须氨基酸、L‑抗坏血酸、亚硒酸钠、纤连蛋白、乙醇胺、氢化可的松、胰蛋白酶抑制剂、人转铁蛋白、人胰岛素、bFGF、TGF‑β1和PDGF‑BB，该培养基克服了现有技术中无血清培养基存在的细胞贴壁性差，组分相对复杂，不支持原代细胞培养等问题。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及到一种间充质干细胞无血清培养基。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一类来源于中胚层的成体干细胞，具有自我更新、多向分化的潜能以及低免疫原性。在体外，间充质干细胞可以诱导分化为上皮、骨、软骨、脂肪、神经、心脏等多种组织细胞，具有促进血管形成、保护神经和细胞替代治疗作用。在临床造血支持、促进干细胞植入和免疫调控等方面，间充质干细胞也具有潜在的临床应用前景。

虽然间充质干细胞来源比较丰富，如脂肪、脐血、脐带、胎盘等组织均可作为其来源，但间充质干细胞是成体干细胞，在体内原始浓度很少，为了满足临床治疗的应用，需要在体外进行快速扩增培养，同时还需保持多向分化潜能和未分化状态，即非分化性增殖成为间充质干细胞进入临床阶段亟待解决的问题。

目前，体外扩增间充质干细胞最常使用的培养基大都含一定浓度的胎牛血清(FBS)。但是，FBS属异种蛋白，成分比较复杂，在临床应用上存在潜在风险。一些临床研究使用人血清或血清衍生物来代替FBS培养间充质干细胞，这些成份虽然来源于人不会引起异种蛋白的免疫，但这些人源成分化学成分不明确，不利用进行间充质干细胞的深入研究，而且目前人血清、血小板资源来源少，对间充质干细胞大规模扩增有一定局限性。因此，发展无血清培养基是干细胞走向临床应用的必然趋势。

目前市场上提出了些无血清培养基，其主要由基础培养基和取代血清的添加剂成分组成。但现有技术中的无血清培养基存在细胞贴壁性差，组分相对复杂，不支持原代细胞培养等问题。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种间充质干细胞无血清培养基，该培养基克服了现有技术中无血清培养基存在的不能有效维持间充质干细胞的分化潜能，组分相对复杂，不支持原代细胞培养等问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种无血清培养基，包含基础培养基和添加在基础培养基中的添加成分，其中所述添加成分包括L-谷氨酰胺、非必须氨基酸、L-抗坏血酸、亚硒酸钠、纤连蛋白、乙醇胺、氢化可的松、胰蛋白酶抑制剂、人转铁蛋白、人胰岛素、bFGF、TGF-β1和PDGF-BB。

其中，L-谷氨酰胺：是一种必需氨基酸，也是培养基的主要成分，作为间充质干细胞增殖的主要能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。

非必须氨基酸：含7种细胞培养所需非必需氨基酸，能有效改善细胞培养基配比。降低间充质干细胞培养时细胞自身生产非必须氨基酸的副作用。

L-抗坏血酸：是体内一种重要的辅酶和抗氧化剂,可参与细胞内呼吸链作用，从而有利于细胞的完整存活和生长发育。最新研究表明抗坏血酸与许多生长因子有协同作用，可显著增加其它生长因子对间充质干细胞的增殖效应。

亚硒酸钠：是无血清培养基的配方常含有抗氧化剂，硒是谷胱甘肽产生的合作因子，促进过氧化物和超氧化化的水解，在代谢解毒中起重要作用。过氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培养基中的过氧化物和超氧化物的累积。

纤连蛋白：是细胞外基质的粘着糖蛋白，能使用细胞和细胞外基质互相粘连，铆钉细胞，同时又介到细胞运动迁移。