[发明专利]人用水痘病毒灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将MRC-5细胞传代不超过34代；

（2）当细胞扩增到融合度90％以上时，将水痘病毒接种到细胞中进行感染；

（3）将感染了水痘病毒的细胞加入含有2％～5％胎牛血清的最低必须培养基中，置于34～37℃细胞培养箱培养；

（4）观察细胞病变程度，待致细胞病变效应达到50％以上时，倒掉培养基，用磷酸盐缓冲溶液洗涤细胞；

（5）加入0 .02％-0 .05％的EDTA溶液洗脱感染细胞，将细胞悬液离心处理，去掉上清，合并、混匀，单瓶取样做无菌检测，-65～-80℃冻存；

（6）将检测无菌的样品进行超声破碎，离心，收集上清液，即病毒原液；

（7）采用超滤膜包对病毒原液进行超滤浓缩，所述的采用超滤膜包对病毒原液进行超滤浓缩是采用截留分子量为100KD或者300KD的超滤膜包对病毒原液超滤浓缩30～60倍；

（8）检测超滤浓缩后的病毒液蛋白含量和病毒滴度；

（9）将β-丙内酯与蛋白含量为35～95mg/mL、病毒滴度不小于4.0lgPFU/mL的病毒浓缩液按体积比1∶8000混合，在3～5℃条件下灭活12～36h，随后在34～37℃条件下水解1.5～3h，得到灭活病毒液；

（10）采用柱层析纯化灭活病毒液，得到灭活病毒纯化液；

（11）将灭活病毒纯化液在MRC-5细胞至少盲传3代，检测病毒滴度，结果均应无空斑形成；

（12）分装、冻干灭活病毒纯化液即得水痘病毒灭活疫苗。

2.根据权利要求1所述的人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述将病毒接种到细胞中进行感染的感染复数为0.01～0.1。

3.根据权利要求1所述的人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤（5）所述的离心条件为3～5℃下3000～4000rpm离心10-15分钟。

4.根据权利要求1所述的人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤（6）所述的离心条件为3～5℃下7000～8000rpm离心10-15分钟。

5.根据权利要求1所述的人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤（8）所述的蛋白含量使用Lowry法检测。

6.根据权利要求1所述的人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤（9）所述的灭活条件为在4℃条件下灭活24h，随后在37℃条件下水解2h。

7.根据权利要求1所述的人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤（10）所述的纯化方式为使用Sepharose 4FF层析柱将病毒灭活液分批上样，在280nm紫外检测下收取水痘病毒蛋白峰，即为灭活病毒纯化液。

8.根据权利要求1所述的人用水痘病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤（8）和（11）所述病毒滴度使用蚀斑法检测。

9.一种权利要求1～8任一项制备的人用水痘病毒灭活疫苗。