[发明专利]一种三叶青组培培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于组织培养领域，具体为一种三叶青组培培养基及其制备方法。

背景技术

三叶青是葡萄科多年生蔓生藤本植物，整株均可入药，地下块根药效更加。三叶青块根粗壮，一般常见有纺锤形、椭圆形或卵圆形。叶互生，叶柄2-4cm，掌状复叶。小叶片呈狭椭圆形至狭卵状椭圆形，长约3-7cm，宽约1.5-3cm。中央小叶较两侧者略大，叶缘具刺状疏齿，叶子两面都无毛，或仅在下面中脉上被毛。由于三叶青的药效价值，因此很值得进行三叶青的组织培养研究。而组培过程中三叶青成活率低是亟待解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种三叶青组培培养基，该三叶青组培培养基可明显提高三叶青块根组织的成活率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:

一种三叶青组培培养基的制作方法，其制备方法包括如下步骤：

(1)在容器内加入纯净水，加热至沸；

(2)将预设组分依次加入容器内，并搅拌均匀，得到混合液；

(3)调节混合溶液的pH，并用锥形瓶分装且封口后，放置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌，得到灭菌完成的混合液；

(4)将灭菌完成的混合液放入超净台冷却，得到三叶青组培培养基。

作为优选，上述步骤(3)中灭菌时间为45-60min。

作为优选，上述三叶青组培培养基包括如下组分：硝酸铵0.8-1.2g、硝酸钾0.4-0.6g、硫酸铁0.2-0.3g、磷酸二氢钾0.4-0.6g、氯化钠0.8-1.2g、葡萄糖1.2-1.4g、光触媒0.1-0.5g、氯化钙0.2-0.3g、甘氨酸0.04-0.06g、生长素0.01-0.02g、细胞分裂素0.03-0.05g、激动素0.01-0.02g、玉米素0.01-0.02g、维生素0.04-0.08g、蔗糖1-3g以及植物生长调节剂0.04-0.09g。

上述培养基内含有三叶青组织培养过程中需要的无机营养物：七水硫酸镁、氯化钙、硝酸铵、磷酸二氢钾、氯化钠；碳源：葡萄糖；有机附加物：甘氨酸和维生素；生长调节剂。上述五大类营养物质是三叶青组织生长过程中不可或缺的；

同时，0.8-1.2g硝酸铵为三叶青组织生长提供了充足的氮源，可以有效促进植物细胞中蛋白质、叶绿素以及核酸的生成；0.4-0.6g磷酸二氢钾也为三叶青组织细胞中生物膜、核苷酸以及核酸的形成提供了充足的磷元素，并且磷酸二氢钾所提供的钾元素可以促进氮素代谢以及碳水化合物的转移，从而加快了三叶青组织细胞的生长；0.2-0.3g氯化钙为三叶青组织细胞壁的生长提供了充足的钙元素；此外，该培养基还添加了七水硫酸镁作为镁源，加快叶绿素的形成；培养基内添加的有机附加物和生长调节剂可以促进三叶青组织快速生长。

上述培养基内还添加有光触媒，即纳米二氧化钛0.2-0.3g及纳米氧化锌0.2-0.3g，光触媒不仅不会抑制三叶青细胞的生长，而且可以有效杀死从高压蒸汽灭菌锅转移至超净台过程中所感染的微生物，弥补了超净台中的紫外杀菌法无法杀死培养基内部杂菌的缺陷。避免杂菌滋生干扰实验人员观察三叶青组织的生长或杂菌影响三叶青外植体的健康生长，从而使得三叶青外植体的成活率降低；并且，本发明所提供的培养基内还配设合适重量份数的植物生长调节剂，该植物生长调节剂可促进三叶青茎块根诱导分化，从而使得该三叶青外植体成活率大大增加。

更加具体地，上述植物生长调节剂包括：生长素0.01-0.02g、细胞分裂素0.03-0.05g、激动素0.01-0.02g以及玉米素0.01-0.02g。

作为优选，所述光触媒为纳米二氧化钛、纳米氧化锌中的一种或两种。

作为优选，所述维生素包括维生素B1和维生素B2中的至少一种。

作为优选，所述的培养基按重量计，包括：硝酸铵0.8-1.2g、硝酸钾0.4-0.6g、硫酸铁0.2-0.3g、磷酸二氢钾0.4-0.6g、氯化钠0.8-1.2g、葡萄糖1.2-1.4g、纳米二氧化钛0.2-0.3g、纳米氧化锌0.2-0.3g，氯化钙0.2-0.3g、甘氨酸0.04-0.06g、生长素0.01-0.02g、细胞分裂素0.03-0.05g、激动素0.01-0.02g、玉米素0.01-0.02g、维生素B1 0.02-0.04g、维生素B2 0.02-0.04g、七水硫酸镁0.2-0.4g、蔗糖1-3g以及纯净水80-100g。