[发明专利]一种可恢复替加环素抗菌活性的方法

说明书

本发明属生物、医药技术领域，涉及重要抗菌药物的药敏试验方法，具体涉及一种可恢复替加环素抗菌活性的方法，为实现体外常规药敏试验测定替加环素敏感性结果的准确性，本方法采用一种稳定剂消除替加环素药敏实验时存在的影响因素，使替加环素恢复其对病原菌的敏感性，建立了一种简单的可准确测定替加环素对病原菌敏感性的方法。本方法中不需要另加入其他试剂，只需在常规操作基础上，在替加环素纸片或MHA琼脂平板上或微孔板中添加适当体积的复敏液即可完成操作，尤其能解决现有技术替加环素药敏试验中存在的如假耐药现象等的重大问题，并具有操作简便、结果准确且重复性好等优点。

技术领域

本发明属生物、医药技术领域，涉及重要抗菌药物的药敏试验方法，具体涉及一种可恢复替加环素抗菌活性的方法，本方法用于针对替加环素的药敏试验及其影响因素恢复替加环素抗菌活性。

背景技术

资料显示了由于抗菌药物的不合理使用及滥用，导致细菌对其的耐药率快速上升。根据2015年CHINET中国细菌耐药监测结果显示，自2005年开始，临床分离的革兰阴性杆菌对重要抗菌药物尤其是碳青霉烯类药物的耐药率快速上升；其中，国内30所医院临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率平均值为15％，部分医院可高达50％；鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类的耐药率平均值在60％以上，部分医院可高达90％；由于碳青霉烯类药物被业内认为之治疗此类耐药细菌所致感染最有效的抗菌药物，因此，细菌对其耐药可导致临床的抗感染治疗陷入无药可用的困境。

替加环素作为治疗碳青霉烯类耐药菌株所致感染的重要抗菌药物，其药敏试验结果的准确性对临床的抗感染治疗选择具有重要的参考价值。实践显示，目前的有关药敏方法中，由于替加环素理化性质活泼，含多酚基团，易氧化降解或形成差向异构体，不宜在光线及空气中久置；配置后的培养基隔夜存放也会使检测结果升高，其中肉汤较琼脂更容易溶解氧，导致采用常规方法测定其敏感性时往往出现假耐药现象。有研究公开了锰离子对Etest法对替加环素测定结果影响的结果显示，在不动杆菌属、黏质沙雷菌、肺炎链球菌中Etest检测方法的MIC结果较微量肉汤稀释法高，尤其是在鲍曼MIC₉₀高4个稀释倍数；培养基存放时间过长对测定结果影响较大，需使用当天新鲜配制的培养基，肉汤培养基中氧含量较高，存放时间过长由于氧化作用而使替加环素失活；有研究以经典的微量肉汤稀释法为参考方法，比较不同药敏试验方法测定替加环素敏感性发现，肉汤微量稀释法的MIC₅₀/MIC₉₀为1/4mg/l，Vitek系统、Etest、MTS方法测定结果分别为：4/≥8mg/l、2/4mg/l、0.5/2mg/l；以FDA或/EUCAST为判断标准，上述三种药敏方法在测定替加环素敏感性上均存在大误差或重大误差。CHINET中国细菌耐药监测结果显示，某些医院若采用常规纸片扩散法药敏试验测定替加环素的药敏试验，其中介率和耐药率之和可达60％以上，而加上此部分菌株若采用微量肉汤稀释法进行测定，中介率和耐药率均为0％。

为解决上述的药敏问题，本申请的发明人拟通过针对替加环素药敏试验的各种影响因素开展研究，提供一种可恢复替加环素抗菌活性的方法，该方法中采用了替加环素复敏液，将有助于解决目前替加环素出现的假耐药现象，为临床合理使用抗菌药物提供强有力的依据。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种可恢复替加环素抗菌活性的方法，该方法中涉及针对替加环素药敏试验影响因素采用一种稳定剂保持替加环素在不同环境下的稳定性，不易被降解。

本发明的可恢复替加环素抗菌活性的方法中，为实现体外常规药敏试验测定替加环素敏感性结果的准确性，采用一种稳定剂消除替加环素药敏实验时存在的影响因素，使替加环素恢复其对病原菌的敏感性；建立了一种简单的可准确测定替加环素对病原菌敏感性的方法。

本方法中不需要另加入其他试剂，只需在常规操作基础上，在替加环素纸片或MHA琼脂平板上或微孔板中添加适当体积的复敏液即可完成操作，尤其能解决现有技术替加环素药敏试验中存在的如，假耐药现象等的重大问题。