[发明专利]一种解脲支原体病毒核酸检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种病原体核酸检测试剂盒，具体涉及一种解脲支原体病毒核酸检测试剂盒。

背景技术

解脲支原体（Ureaplasma Urealyticum，UU) 是人类泌尿生殖道常见的寄生菌之一，在特定环境下可致病。主要通过性生活传播，亦可以经胎盘垂直传播或由孕妇下生殖道感染上行扩散，引起宫内感染。其感染可导致不孕不育、孕妇流产、早产、胎儿发育迟缓等一系列不良后果。。UU在人体定植数量有两次高峰期，即分娩时由母体产道感染新生儿，以后迅速减少，从性生活开始又逐渐增多。UU大小一般为50一300 nnl ，结构简单，无细胞壁，其形状呈高度多态性。营养要求高，生长缓慢。耐酸，最适pH值为6．0。固体培养基上形成的菌落微小，只有数十微米，因此又曾将UU称之为“T株”(tiny strain)。UU的致病机制尚不十分清楚，认为可能与其侵袭性酶和毒性产物有关，其中神经氨酸酶样物质可干扰精子和卵子结合，可能与不孕症有关。目前病原学检查方法主要有分离培养及分子生物学检测，也有人以uu培养物为抗原，采用酶联免疫吸附技术检测患者血清抗体。不同方法各有其特点，寻求快速、简便、准确检测uu的方法对于临床诊治十分必要。

目前，市面上的解脲支原体病毒检测试剂盒一般使用的是普通荧光探针，普通探针存在着检测灵敏度低、特异性差等缺点，容易导致检测出假阴性和假阳性结果。同时市面上已有的检测试剂盒普遍使用的是热启动酶反应体系，启动时间长，反应过程耗费的时间较长。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种解脲支原体病毒核酸检测试剂盒，解决市面上普通解脲支原体病毒检测试剂盒检测灵敏度低、特异性差以及检测时间长等问题。本发明所采取的技术方案是：

一种解脲支原体病毒核酸检测试剂盒，包括DNA提取液，快速Taq酶系统和解脲支原体病毒检测引物探针，其中，解脲支原体病毒检测引物探针是由针对解脲支原体设计特异性的引物及对应的荧光探针组成,引物和探针的序列如下：

其中，探针的一端标记有MGB基团。

优选的，所述的x指荧光报告基团，可选自FAM、VIC、TEXAS RED中的其中一种。

优选的，本发明试剂盒所采用的探针为MGB探针，即探针的一端标记有MGB基团。

MGB探针的淬灭基团采用非荧光淬灭基团(Non-Fluorescent Quencher),本身不产生荧光,可以大大降低本底信号的强度，同时探针上还连接有MGB (Minor Groove Binder)修饰基团,可以将探针的Tm值提高10°C左右.因此为了获得同样的Tm值,MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短,既降低了合成成本,也使得探针设计的成功率大为提高，因为在模板的DNA碱基组成不理想的情况下,短的探针比长的更容易设计，这更好的提高了检测的灵敏度。另外，当MGB探针和模板全部特异性结合时，反应能够顺利进行，原则上MGB探针与模板之间只要有一个碱基错配，MGB探针就会检测到(MGB探针将不会与目的片段杂交，不产生荧光信号)，大大提高了检测的特异性。

优选的，引物和探针在反应体系中的浓度为：SEQ1为10pM，SEQ2为10pM，SEQ3为3pM。

优选的，所用的引物和探针的用量比例为：SEQ1：SEQ2：SEQ3 = 10：10：3。

快速Taq酶系统的组成为dNTPS（U）、UNG酶、快速Taq酶。

快速Taq酶启动反应的时间只需5分钟，比普通热启动酶快了3倍，同时快速Taq酶延伸的效率非常高，只需15秒就能完成相当于普通Taq酶1min的工作量。快速Taq酶系统的应用，使整个反应的时间由普通反应体系的2个小时缩短到45分钟。

优选的，快速Taq酶系统中，dNTPS（U）中各种成分用量的比例为：dATP：dTTP： dCTP: dGTP：dUTP = 10：1：10：10：10。

优选的，快速Taq酶系统中，UNG酶的用量为0.4U-0.7U，快速Taq酶用量为2U-5U。

优选的，DNA提取液的组分包括1%~10% Triton-100、1%~10% Tween85、0.1%~1% NaOH、3%~15% Chelex-100和水。

本发明的有益效果是：

1) 本发明的检测方法使用的是MGB探针，由于能够识别至少1个碱基的错配，大大提高了检测的灵敏度和特异性。