[发明专利]一种肿瘤靶向多臂聚乙二醇‑雷公藤甲素纳米药物的制备

说明书

技术领域

本发明涉及了一种肿瘤靶向多臂聚乙二醇-雷公藤甲素纳米药物的制备，特别是涉及一种利用多臂聚乙二醇与疏水药物的反应，同另一种疏水药物自组装形成纳米粒子的方法，靶向肿瘤部位，属于先进纳米技术和生物制药领域。

背景技术

雷公藤甲素（Triptolide, TP）是中药雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f.）中分离出的活性最高的环氧化二萜内酯化合物，是雷公藤的主要有效成分之一。由于雷公藤的生理活性强，具有显著的免疫抑制、抗炎、抗肿瘤和抗生育作用。但它属于毒性很强的药物，临床不良反应的发生频率远高于其它药物，主要发生在消化系统、泌尿系统、生殖系统、心血管系统、骨髓和血液系统。其中又以消化系统最为常见，主要表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻及消化道出血等。因此，研究新型的给药系统以降低其毒性具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种肿瘤靶向多臂聚乙二醇-雷公藤甲素纳米药物的制备，该方法具有成本低，纳米粒子均一，叶酸靶向肿瘤，抑制肿瘤生长，促进凋亡。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：所述的自组装靶向叶酸抗癌药物是由多臂聚乙二醇与雷公藤甲素偶联形成前体药物，叶酸用乙二胺修饰成带氨基的反应末端基，与前药偶联，并与另一种抗癌药物羟基喜树碱自组装制备多臂聚乙二醇-雷公藤甲素（羟基喜树碱）纳米药物。具体步骤如下：

（1）将叶酸溶解在二甲基亚砜中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）激活30分钟，再加入激活剂N-羟基琥珀酰亚胺和乙二胺，吡啶5毫升，反应12小时；

（2）向上述溶液中加入3倍体积的乙醚，沉淀叶酸衍生物，将沉淀物离心，并加乙醚多次洗涤，最后沉淀物真空干燥，得到黄色粉末；

（3）将多臂聚乙二醇分散于吡啶中，浓度为0.01-5 毫克/毫升，磁力搅拌10-30分钟，使其溶解，加入EDC，激活羧基30分钟，再加入催化剂4-二甲氨基吡啶（DMAP）；

（4）取适量雷公藤甲素溶于吡啶，并转移到多臂聚乙二醇溶液中，35℃反应过夜，并连续通入氮气，去除酯化反应生成的水；

（5）向反应后的混合液中1:3（体积比）的比例加入无水乙醚，出现絮状沉淀，4000转离心30分钟，收集沉淀，继续用乙醚洗涤沉淀两次，离心收集固体沉淀，真空干燥，得到多臂聚乙二醇-雷公藤甲素白色粉末；

（6）取上述粉末适量溶于吡啶，加入叶酸衍生物，EDC和DMAP，反应48小时，向反应后的混合液中1:3（体积比）的比例加入无水乙醚，4000转离心30分钟，收集沉淀，继续用乙醚洗涤沉淀两次，离心收集固体沉淀；

（7）将上述所得固体沉淀溶于去离子水，用磷酸盐缓冲溶液透析12小时，并轻微搅拌透析外液，加快透析速度，每隔4小时更换透析外液；

（8）将上述透析物零下80℃冷冻过夜，并冷冻干燥48小时，得到叶酸-多臂聚乙二醇-雷公藤甲素黄色粉末；

（9）取上述粉末适量与羟基喜树碱共同溶于二甲基亚砜，搅拌均匀，然后缓慢滴入剧烈搅拌的去离子水中，自组装得到纳米粒子，将溶液8000转离心30分钟，收集沉淀物，重新分散在去离子水中，透析6小时，透析物零下80℃冷冻过夜，并冷冻干燥48小时，得到黄色粉末，即为叶酸靶向多臂聚乙二醇-雷公藤甲素（羟基喜树碱）纳米药物。

所述的多臂聚乙二醇可为单臂，四臂或八臂聚乙二醇，可以含不同的官能团，与不同拒水药物发生反应，且分子量2000~80000之间；

所述的不溶水药物雷公藤甲素依然适用于含反应功能基团的其它拒水药物，如熊果酸，紫檀起，双氢青蒿素等；

所述的包裹药物羟基喜树碱可以由其它疏水性强的药物替代，或者纳米级金属，纳米级金属氧化物；

所述的吡啶用四氢呋喃、二甲基亚砜、二氯甲烷替代，其偶联方法仍然适用；

所述的纳米粒子粒径均一，且在10-100nm。

本发明具有以下优点：

1）本发明的反应机理是通过高分子化合物多臂聚乙二醇的羧基与雷公藤甲素的羟基发生酯化反应，得到多臂聚乙二醇药物偶联物。

2）多臂聚乙二醇药物偶联物通过酰胺键与肿瘤靶向分子叶酸连接，使多臂聚乙二醇具有靶向功能。

3）本发明的自组装过程是通过反应到多臂聚乙二醇上的疏水药物基团的拒水作用，形成空心内核，多臂聚乙二醇的亲水端为外层，疏水药物羟基喜树碱为内核核心，自组装形成的两亲性纳米粒子，纳米粒子均一。