[发明专利]一种新生骡驹溶血病检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种检测新生骡驹溶血病的试剂盒，一种新生骡驹溶血病检测试剂盒，所述试剂盒包括一列试剂制备瓶和一列诊断管，所述试剂制备瓶包括5个空的具塞试剂瓶，用于配制初乳稀释液；所述诊断管包括4个具塞凝胶管，每一个凝胶管中部设置砂芯，砂芯上预装填凝胶悬浮液。本发明同时提供了该试剂盒的制备方法，包括凝胶悬浮介质的制备，凝胶的制备，凝胶的制备，凝胶悬浮液的制备以及凝胶管中预装填凝胶悬浮液。采用本发明方法制备的新生骡驹溶血病检测试剂盒，检测灵敏度高且质量稳定，大大缩短了检测时间；现象明显，便于肉眼观察；无需对照组，检测效率高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种新生骡驹溶血病检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

初生骡驹溶血病主要是初生马骡驹突然发生的一种急性溶血性疾病，主要特征是贫血、黄疸和血色素尿，故又称为溶血性黄疸，马骡驹发病率有时高达30％，发病快(出生后数小时到三天内发病)，若不及时治疗，死亡率极高。

骡驹是马和驴的杂交后代，其红细胞膜上带有来自父系的种属性抗原。妊娠期间，如果胎盘有轻微的损伤，胎儿红细胞就能进入母体血液循环，刺激母体产生抗体。如一怀孕母马尤其胎儿红细胞抗原所致敏，产生的抗体在分娩前就有选择的分布于初乳之中，这些抗体被新生骡驹咽下后，由小肠吸收进入体循环，破坏幼驹的红细胞，发生溶血病。

由于发病后再治疗，多有时来不及抢救，故应在发病前预先诊断。目前所采用的的检测方法有酶试验法、凝聚胺法、微胶柱法等，传统试管方法操作繁琐、易漏检、错检、微胶柱方法成本过高或测得效价高于实际效价。至今，国内外没有专门用于新生骡驹溶血病检测的易操作、成本低廉的试剂盒生产。

相关论文中介绍了采用凝集反应诊断新生骡驹溶血病的方法，该方法操作简单，可应用于基层兽医站。然而所述方法操作中，样品被放置于平玻璃板上，在室温下静置20-30分钟后观察。是否产生凝集反应，以及凝集反应产生的位置并不能清楚观察，红细胞自身凝集也可能被误认为抗原抗体反应后的凝集反应。

因此，需要一种灵敏度高、特异性好、易于快速、准确观察现象且质量稳定的骡驹溶血病检测试剂方法。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足，提供一种灵敏度高、特异性好、易于快速、准确观察现象且质量稳定的骡驹溶血病检测试剂盒。本发明的实现方案如下：

一种新生骡驹溶血病检测试剂盒，所述试剂盒由一列试剂制备瓶和一列诊断管组成，所述试剂制备瓶包括5个空的试剂瓶，用于配制初乳稀释液；所述诊断管包括4个凝胶管，每一个凝胶管中部设置砂芯，砂芯上预装填凝胶悬浮介质。

其中，所述凝胶管的制备过程包含如下步骤：

步骤一，凝胶悬浮介质的制备：

各成分配比如下：

复合对羟基苯甲酸酯(3.0-4.5)×10^-3g/ml；

氯化钠(1.70-1.74)×10^-3g/ml；

甘氨酸(1.73-1.77)×10^-3g/ml；

叠氮钠(1.73-1.77)×10^-3g/ml；

无水磷酸氢二钠(1.73-1.77)×10^-3g/ml；

磷酸二氢钾(1.73-1.77)×10^-3g/ml；

将以上试剂用纯化水溶解，调节pH值为6.6-6.8；

步骤二，凝胶的制备：