[发明专利]一种人3型腺病毒的中和性人源化单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种人3型腺病毒的中和性人源化单克隆抗体及其制备方法和应用，该抗体基因含有如SEQ ID NO：43和44所述序列。本发明还提供了制备方法：扩增鼠源性单克隆抗体的轻链和重链序列；将轻链序列与人轻链恒定区序列和轻链信号肽连接，将重链序列与人重链恒定区序列和重链信号肽连接，轻链信号肽由人骨粘连蛋白信号肽所替换，重链信号肽由前胰蛋白酶信号肽所替换；再分别插入真核表达载体中，转染到细胞系。本发明提供的抗体基因含有如SEQ ID NO：43和44所述序列，并通过更换信号肽、提供适合的信号肽的组合，提高了人3型腺病毒中和性人源化单克隆抗体的产量，对研制高产量的可治疗感染性疾病的单抗有着重要意义。

技术领域

本发明属于免疫学与分子生物学领域，具体涉及一种人3型腺病毒的中和性人源化单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

腺病毒的传播途径主要通过人、水、器械等传播。在常温下，腺病毒能在被污染物种内存活长至3周。儿童更容易发生腺病毒感染并且大规模流行，研究表明大多数婴幼儿在出生后至少感染过一种腺病毒。腺病毒也能感染免疫力低下的宿主，例如免疫遗传缺陷的病人、艾滋病人等，造血干细胞移植者如被腺病毒感染，常能引发高发病率与死亡率。其中HAdv-3症状比其他型较为严重，在全年整年都均能导致一系列的呼吸道及肠道等临床症状。

腺病毒是没包膜病毒，在低pH的环境下也可稳定存活，有强的耐化学和物理试剂作用，腺病毒可抵抗胃肠分泌物及胆汁的分解，所以它能在胃肠内大量复制。因为腺病毒能在人的咽、肠道、呼吸道内繁殖，能导致许多各种不同的临床症状，例如：呼吸道感染、胃肠炎、肝炎等。

目前在世界范围内还没有针对腺病毒的疫苗和特异有效的治疗药物，也无有效的中和性治疗抗体，其治疗主要采取对症治疗。接种腺病毒疫苗是预防腺病毒感染最有效的方法之一，腺病毒疫苗近年来成为国内外研究的热点。在抵抗病毒感染中，特异性中和抗体发挥重要作用，已有研究表明输注中和性抗体进行被动免疫可能是目前治疗病毒感染的最有效的方法，制备特异性抗腺病毒感染的中和性单克隆抗体对于治疗腺病毒重症感染有重要意义。

但是目前还没有高中和效价的抗腺病毒3型的单克隆抗体的报道。而抗体分泌量低是世界难题，分泌量会因抗体的结构发生变化，人源化改造后的抗体有可能导致抗体分泌量更低，目前尚未有高分泌量的人源化人腺病毒3型的单克隆抗体的报道。

发明内容

为克服上述技术缺陷，本发明提供了一种人3型腺病毒的中和性人源化单克隆抗体及其制备方法和应用，获得针对人3型腺病毒的中和活性人源化单克隆抗体，采用抗体基因信号肽更换其他人源蛋白信号肽的方法达到使该抗体分泌量大大提高的目的。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种人3型腺病毒的中和性人源化单克隆抗体，包含轻链序列和重链序列，所述抗体的基因含有如SEQ ID NO：43和SEQ ID NO：44所述序列。

优选的，所述轻链序列包含如SEQ ID NO：43所述序列。

优选的，所述重链序列包含如SEQ ID NO：44所述序列。

本发明还提供了制备上述人3型腺病毒的中和性人源化单克隆抗体的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)扩增鼠源性单克隆抗体的轻链和重链序列；

(2)将所述步骤(1)中得到的轻链序列与人源抗体轻链恒定区序列和人源抗体轻链信号肽连接，得到轻链连接序列；将所述步骤(1)中得到的重链序列与人源抗体重链恒定区序列和人源抗体重链信号肽连接，得到重链连接序列；

(3)将所述步骤(2)中得到的轻链连接序列和重链连接序列分别插入到真核表达载体中；

(4)将所述步骤(3)中得到的插入后的真核表达载体转染到细胞系，得到稳定表达所述抗体的细胞系。