[发明专利]凝结芽孢杆菌在制备预防或治疗支气管哮喘制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及凝结芽孢杆菌在制备预防或治疗支气管哮喘制剂中的应用，具体是用凝结芽孢杆菌预防或治疗支气管哮喘，降低气道高反应性、减轻哮喘症状。

背景技术

支气管哮喘(简称哮喘)是世界范围内严重威胁公众健康的慢性疾病之一，是一种严重的呼吸道疾病。支气管哮喘患者具有气道高反应性，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作性的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状。支气管哮喘不但发病率高，而且病程长且发作反复，已经成为了一个严重的公共卫生问题。由哮喘所带来的经济负担无论从直接医疗费用(住院和药品使用)还是间接的非医疗费用(包括误工及非正常死亡)都相当大。WHO报道，在全世界范围计算，哮喘相关的经济花费比结核病和艾滋病的总数还高。儿童期是哮喘发作的敏感阶段，哮喘导致的患儿缺课率升高、活动受到限制、影响社交能力等，对儿童的发育和成长产生更为深远的影响。

目前哮喘的治疗常用药物包括吸入糖皮质激素(简称激素)、白三烯调节剂、长效β₂-受体激动剂等。目前激素是临床上最常用的药物，但部分哮喘患者对激素不敏感，依从性不佳，长期或较高剂量应用会增加药物不良反应。

本发明人经过研究发现，凝结芽孢杆菌能够有效预防或治疗支气管哮喘，安全没有任何毒副作用，效果优于双歧杆菌，且未见相关研究报道，特申请此发明专利。

发明内容

本发明的目的是提供一种能预防或治疗支气管哮喘的制剂，该制剂由凝结芽孢杆菌制成。

本发明的制剂的制备优选是通过下述步骤实施的，但不局限于此制备工艺，公知的能实现的制备工艺均可以：采取可能含凝结芽孢杆菌的样品，然后将样品置于灭菌瓶内，研究时从中取一定量的样品加入18mL灭菌的稀释液中，充分混匀，在无菌操作台内，进行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7梯度稀释，取10^-5、10^-6、10^-7三个稀释梯度，分别涂布于凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于培养箱，37℃下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种于液体扩增培养基中，置于培养箱内，37℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出干燥菌粉，然后根据《伯杰细菌鉴定手册》、相关细菌鉴定文献或16S rRNA序列对比分析进行凝结芽孢杆菌鉴定和毒性试验，将无毒性的凝结芽孢杆菌干燥菌粉按需要比例添加辅料制成片剂、胶囊、散剂、粉剂或液体制剂等各种剂型，也可加入其他活菌或低聚果糖等低聚糖起到协同作用。

凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于：纯化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，酵母粉5g，葡萄糖5g，磷酸二氢钾2g，吐温801.0ml，碳酸钙20g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，琼脂15g，调pH 6.2-6.5，115℃高压灭菌20min。

凝结芽孢杆菌液体扩增培养基优选但不局限于：纯化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，葡萄糖5g，调pH 7，115℃高压灭菌20min。

为进一步具体说明本发明，发明人利用上述方法通过凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基分离鉴定出了无毒性的凝结芽孢杆菌，本发明所述凝结芽孢杆菌并不局限于为说明本发明所述的菌，只要无毒性的凝结芽孢杆菌均是本发明所述，均在本发明的保护范围内。

本发明所述凝结芽孢杆菌优选但不限于凝结芽孢杆菌TBC169保藏编号CGMCC1207或凝结芽孢杆菌保藏编号CGMCC1.2407。

本发明实施说明中优选使用的凝结芽孢杆菌的细菌学性质：

1、为说明本发明，本发明利用上述方法分离的凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌TBC169保藏编号CGMCC1207。

2、菌落形态

显微镜观察：杆状，革兰氏染色阳性。

平板形态：菌落呈白色、圆形、边缘整齐、大小2-3mm。

3、生理生化鉴定

明胶液化：－；过氧化氢酶：+；VP试验：+；苯丙氨酸脱氨酶试验－。

4、糖酵解实验鉴定

葡萄糖：+；麦芽糖：+；蔗糖：+；木糖：－；果糖：+；鼠李糖：－；乳糖：+；菊粉：+；半乳糖：+；糊精：+。