[发明专利]一种用于检测手足口病相关病原体的LAMP引物组合物及其相关应用

说明书

本发明提供了一种用于检测手足口病相关病原体的LAMP引物组合物及其相关应用，本发明提供的用于检测手足口病相关病原体的LAMP引物组合物灵敏度高、准确性好，同时本发明将基于LAMP法的微流控芯片技术应用于手足口病相关病原体的检测，利用微流控芯片高通量、快速、灵敏、特异性好的特点，提高手足口病相关病原体的检测速度、通量和灵敏度，大大降低成本，缩短检测时间。

技术领域

本发明涉及传染性疾病诊断技术领域，尤其涉及一种用于检测手足口病相关病原体的LAMP引物组合物及其相关应用。

背景技术

手足口病(Hand-foot-mouth Disease,HFMD)是由多种人肠道病毒引起的一种儿童常见传染病，是我国法定报告管理的丙类传染病。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要症状。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，可导致死亡。

引起手足口病的病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属，包括柯萨奇病毒A组(CoxasckievirusA,CVA)的2、4、5、7、9、10、16型等，B组(Coxasckievirus B,CVB)的1、2、3、4、5型等；肠道病毒71型(Human Enterovirus 71,EV71)；埃可病毒(Echovirus,ECHO)等。柯萨奇病毒是从1948年Dolldorf和Sickles在美国纽约州Coxsackie镇，从临床诊断为脊髓灰质炎的患儿粪便中分离出来的一组病毒。该病毒的毒粒为二十面体，立体对称，呈球形状，裸露的核衣壳，直径约23-30nm，无包膜，无突起，病毒有核酸和蛋白质组成。人类手足口病中以EV71、CVA16、CA10以及CA6型较为常见。人类肠病毒71型于1969年首次从加利福尼亚患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中分离出来的，EV71为目前肠病毒群中最晚发现的病毒，其感染性强且致病率高，尤其是神经系统方面的并发症。近年来，国内陆续发现CA6以及CA10型逐渐流行，慢慢占据主要流行株。

人类是肠病毒唯一的传染来源，主要经由肠胃道(粪-口、水、食物污染)或呼吸道(飞沫、咳嗽或打喷嚏)传染，也可经由接触病人皮肤水泡的液体而受到感染。在发病前数天，喉咙部位与粪便就可发现病毒，此时即有传染力，通常以发病后一周内传染力最强；而患者可持续经由肠道释出病毒，时间长达8到12周之久。潜伏期为2到10天，平均约3到5天。肠病毒适合在湿、热的环境下生存与传播。截至2016年12月31日，全国已累计报告手足口病发病例数为2468174例，其中，死亡数为201例。全国的手足口病防控形势十分严峻。

目前手足口病肠道病毒核酸检测类的产品都是胶体金、酶联免疫以及荧光PCR产品。其中以荧光PCR法居多，但是该检测方法具有检测靶点少，灵敏度较低，操作繁琐，检测耗时，检测仪器费用昂贵等缺陷。因此，因此，在科学研究和生产实践中均需要一种快速简便、容易普及、安全有效且适用于现场操作的快速检测方法。

环介导等温基因扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification，以下简称LAMP法)是日本荣研化学株式会社于2000年前后开发出的基因扩增技术，其具有快速、灵敏、特异性强等优点，可以用于病原体的核酸快速检测。微流控芯片作为一种新型核酸检测技术具有高通量、快速、准确、可靠等特点，能够实现对组群病原体样品进行多目标同时检测。如果将两者进行结合，则极大的提高病原体核酸检测的效率。因此，将LAMP等温扩增与微流控芯片相结合，尚属首次应用于手足口病相关病原体的检测与分型。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题提出的一种用于检测手足口病相关病原体的LAMP引物组合物及其相关应，本发明的具体技术方案包括：

首先，本发明的第一个方面提供了一种用于检测手足口病相关病原体的LAMP引物组合物，包括肠道病毒EV通用型引物组、肠道病毒EV71型引物组、肠道病毒CA16型引物组、肠道病毒CA10型引物组、肠道病毒CA6型引物组中的任意一组或几组；