[发明专利]检测茄匍柄霉菌的成套试剂及应用

说明书

本发明公开了检测茄匍柄霉菌的成套试剂及应用。本发明公开的检测茄匍柄霉菌的成套试剂由名称为Stem14‑FIP的单链DNA、名称为Stem14‑BIP的单链DNA、名称为Stem14‑F3的单链DNA、名称为Stem14‑B3的单链DNA、名称为Stem14‑LF25的单链DNA和名称为Stem14‑LB25的单链DNA组成，其序列分别为序列表中SEQ ID No.1‑6。本发明的成套试剂可以特异检测茄匍柄霉菌，其检测茄匍柄霉菌的灵敏度可达2.4×10⁰pg基因组DNA/μL。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，检测茄匍柄霉菌的成套试剂及应用。

背景技术

匍柄属真菌(Stemphylium)能够侵染全球范围内多种作物，可以引起多种蔬菜病害，主要危害蔬菜包括番茄、莴苣、辣椒、甘蓝、菠菜、大蒜，其中尤以危害番茄最为严重。美国、以色列、新西兰等地均报道过由匍柄霉引起的番茄叶斑病，给当地番茄生产造成了巨大的经济损失。近年来，我国东北、华北、华东和华南等地50万亩的番茄灰叶斑病发生尤为严重。其中尤以山东寿光、海南海口、广西田阳发病最为严重，总发病面积超过10万亩，损失超过千万元。

番茄是茄果类蔬菜中非常重要的一种蔬菜，是我国蔬菜种植业中的主要栽培作物之一。目前，中国番茄的种植、加工和出口都处于持续增长态势，经过20多年的发展中国已成为全球最重要的番茄制品生产国和出口国，是继美国、欧盟之后的第三大生产地区和第一大出口国。自2002年以来番茄匍柄霉叶斑病在国内各大番茄主产区陆续发生，渐由次要病害上升为主要病害，对我国番茄产业的发展带来严重的影响。

2002年在山东鱼台县种植的3万个大棚中，病棚率为43％，2003年病棚率为90％，防治不及时，番茄减产20％左右，有的甚至减产80％，同时造成番茄果实质量下降。在贵州高山地区种植的进口番茄品种表现出了对番茄灰叶斑病的高感性，2005年在贵阳市白云区、息烽县、修文县等地大面积暴发，由于番茄灰叶斑病在以往种植的品种上极少发现，农民缺乏防治经验，因而防治不力，给生产带来毁灭性打击。李宝聚等在蔬菜病害调查过程中发现，北京大兴、辽宁海城、河北廊坊、保定以及山东寿光等地都有该病的发生，但当时并未造成产量损失

2009～2016年的蔬菜病害调查过程中我们发现，番茄匍柄霉叶斑病发生面积逐年扩大，在海南省海口市西秀镇龙头村、灵山镇大昌村，山东寿光洛城镇黄家尧水村，山东寿光田柳镇陈马村、邵家岭村、毛家村、闫家庄子村，广西资源县资源镇同禾村鸭子背屯、广西资源县车田乡黄保村、广西资源县东田苗族乡海棠村等地都发现了番茄匍柄霉叶斑病的严重危害。尤其是在山东寿光田柳镇陈马村，番茄自定植后不久即开始零星发生匍柄霉叶斑病，遇到连阴天湿度大，温度忽高忽低时，病害快速扩展，至第6穗果座果时，棚内发病率达到90％以上，严重影响了番茄的产量，给农民带来了巨大的损失。

经过系统研究发现，茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)是国内侵染番茄的主要种。植物病原微生物检测通常采用形态学及分子生物学手段，方法各有优劣，多元化的检测手段才能更好的为生产服务。2000年日本荣研化学的Notomi博士在传统PCR技术基础上发明了LAMP技术，具有简便、准确、快速等突出优点。但是目前尚未有很好的检测茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测检测茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了可以用于检测或辅助检测茄匍柄霉菌或检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害的成套试剂，所述成套试剂包括名称为Stem14-FIP的单链DNA、名称为Stem14-BIP的单链DNA、名称为Stem14-F3的单链DNA和名称为Stem14-B3的单链DNA；

所述Stem14-FIP为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.1的单链DNA；