[发明专利]可分泌抗H-FABP单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可分泌抗H‑FABP单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用。该杂交瘤细胞为两株，保藏在湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心，保藏号是CCTCC No：C2016220和CCTCC No：C2016219。上述杂交瘤细胞的分泌产量高，分泌得到的抗H‑FABP的单克隆抗体具有高亲和力、高特异性等优点，可广泛应用在心脑血管疾病诊断的检测领域。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种可分泌抗H-FABP单克隆抗体 的杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

脂肪酸结合蛋白(FABP)是一组多源性的小分子细胞内蛋白质，分子质量 约为12kDs～15kDs，广泛存在于哺乳动物的心肌、小肠、肝脏、脂肪组织、脑、 表皮等组织细胞中。目前已发现的FABP有9种不同的亚型，常见的有心肌型 脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肾脏型脂肪酸结 合蛋白(K-FABP)、骨骼肌型脂肪酸结合蛋白(S-FABP)等。

其中，H-FABP大量的存在于心肌组织中，约占心脏全部可溶性蛋白的 5％～15％，属于细胞内小的疏水基配体结合蛋白家族，是细胞内重要的载体蛋白， 可与心肌细胞内作为能源的难溶性长链脂肪酸的疏水部分相结合，起着将上述 物质从细胞质膜向脂化和氧化部位运输的作用。H-FABP的相对分子量约为 14kDs～15kDs，等电点(PI)约为5.1。H-FABP在正常人的血液中含量很小，当 心肌细胞受损时可快速释放到血液中。

心脑血管疾病是全球头号死因，每年死于心脑血管疾病的人数多于任何其 他死因。而急性心肌梗死(AMI)是心血管疾病的主要类型，心梗发病极为迅 速，在所有死亡病例中，有2/3是在送医途中病逝的。所以早发现早疏通一直都 是治疗的关键。在临床上，若病人出现胸骨后剧烈疼痛和12导联心电图ST段 升高，则可初步诊断为心肌梗死，需要做血管疏通治疗，但具有上述症状而最 终确诊为心肌梗死的患者仅占总数的约5％。此外，大部分心梗发病者不出现明 显的症状或症状不明显，容易被患者忽视，而一旦察觉则已危及性命。

利用传统的物理检测手段，一方面无法排除有梗死症状但实际上不是心肌 梗死的病人，另一方面无法确诊没有症状而实际上是心肌梗死的病人。基于上 述原因，心肌损伤标记物检测则成为诊断的重要条件。一般临床上应用最较多 的心肌损伤标志物包括脑钠肽(BNP)或N端脑钠肽前体(NT-proBNP)、肌酸 激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)或肌钙蛋白T(cTnT)和肌红蛋白 (MYO)等。全球心肌梗死定义推荐使用cTnI/T和CK-MB这两类标志物，但 是它们都是发病后6小时以后的指标，不适用于早期诊断。相比于cTnI/T或 CK-MB，心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和MYO都是小分子，心梗发生后 释放速度非常快，因而特别适合于心肌梗死的早期诊断。相较MYO而言， H-FABP在心肌的含量要远高于骨骼肌，因而它指示心肌损伤时特异性会优于 MYO。

然而，正常人血液中的H-FAPB浓度很低(一般小于<10ng/ml)，虽然心肌 损伤后浓度会升高，但依然无法用常规的化学定量方法测出。传统的酶联免疫 法(ELISA)、放射免疫法(RIA)、胶体金免疫层析法等也无法准确检测极微量 H-FAPB含量的样本。且上述检测方法存在一些缺陷，限制了它们在临床诊断中 的大规模应用。例如ELISA检测耗时长，操作步骤繁琐，重复性较差。RIA需 要特定的仪器，且操作人员会接触放射性物质，会损害操作人员的身体，同时 使用完成后的放射性材料的处置也是个严重问题。而目前免疫层析法产品虽多， 但普遍存在特异性不高、性能不稳定等问题。

发明内容

基于此，有必要提供一种特异性较高、性能稳定的H-FABP检测试剂盒， 以及可应用在该H-FABP检测试剂盒中的可分泌抗H-FABP单克隆抗体的杂交 瘤细胞及其制备方法、单克隆抗体及应用。

一种可分泌抗H-FABP单克隆抗体的杂交瘤细胞，保藏号为CCTCC No： C2016220。