[发明专利]一种用于快速检测中药材西红花的LAMP引物及包含该引物的检测试剂盒

权利要求书

1.一种西红花检测用引物组，所述引物组由下列引物组成：

CS-F3：TTGTATGGCCAATCATTGTG

CS-B3：ATTCTATTGGACATAGAATGCC

CS-FIP：ACTCAACATGAGGGAGGAGAAAGGGTATAATGGTAGATGCCCG

CS-BIP：TTCCCGATAAATGATTGGCTACAAAGGAGTAATCCGCTGTGA

2.一种用于西红花药材的检测方法，该方法用于检测药材中是否存在西红花，其特征在于以西红花的psbA-trnH基因GenBank登陆号：KX108704.1核酸序列为靶序列，通过LAMP法用权利要求1所述引物组选择性扩增所述靶基因，确认是否存在扩增产物。

3.根据权利要求2所述的西红花药材的检测方法，其特征在于环介导的等温扩增反应体系包括2.5μL 10×ThermoPol缓冲液，两个内引物CS-FIP和CS-BIP的终浓度为1-2μM，两个外引物CS-F3和CS-B3的终浓度为0.1-0.4μM，dATP、dGTP、dCTP、dTTP各1-2.5mM，甜菜碱0.5-3M，待检样品DNA 1-100ng，Bst DNA聚合酶5-20U，钙黄绿素1μL，反应程序扩增温度63-68℃；所述检测方法具体为：1)样品处理和模板提取，样品范围适用于西红花药材及其原植物；2)西红花的环介导等温扩增，取扩增反应液，先加待测模版，再加酶，最后加双蒸水，形成如下总体积为25μL的反应体系，混匀后在约63-68℃内保温30-70min，然后80℃保温10min；3)LAMP反应结束后，裸眼检测被检样品LAMP反应产物的颜色，如果颜色为绿色或黄绿色则表示检测药材中存在西红花，如果是桔色则表示检测药材不存在西红花。

4.一种西红花检测用试剂盒，其特征在于由提取试剂A组成为0.5M氢氧化钠、1％PVP(聚吡咯烷酮)、1％Triton X100(曲通X100)，中和试剂B组成为0.1M Tris-HCl，扩增试剂C三个组件组成，扩增试剂C每管22μL含2.5μL10×ThermoPol缓冲液，两个内引物CS-FIP和CS-BIP的1.6μM，两个外引物CS-F3和CS-B3，0.2μM，dATP、dGTP、dCTP、dTTP各1.25mM，甜菜碱1M，13.9μL双蒸水，试剂D为LAMP扩增所用Bst DNA聚合酶，试剂E组成为钙黄绿素终浓度2.5μM；该试剂盒使用方法具体为：1)模板DNA制备：取1-3mg粉碎的样品，加入20μL提取试剂A，充分混匀2min；加入80μL中和试剂B，离心3min；取20μL上清；加入80μL中和试剂B，离心3min；取1μL用作模板；2)LAMP反应及检测：取扩增试剂C1管，加入1μL模板DNA及8U Bst DNA聚合酶及1μL实际E，混匀后在约63-68℃内保温30-70min，然后80℃保温10min；据权利要求3所述的西红花检测方法观察LAMP反应产物颜色判别是否存在西红花。