[发明专利]一种人血白蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物制品技术中蛋白质的分离、提取方法，具体涉及人血白蛋白的制备方法。

背景技术

人血浆白蛋白(HPA)是有585个氨基酸组成的单链非糖蛋白，分子量为66KD，是血浆中含量最多的一种蛋白质，在人体内HPA主要生理功能是维持血液渗透压和携带血液中多种配基(包括脂肪酸、氨基酸、类固醇、金属离子及药物)与组织进行交换等生理功能，临床上主要用于手术输血和危重病人补液，治疗创伤休克、发烧、水肿、低白蛋白血症和红细胞过多症等，而且能增强人体抵抗能力，是重要的临床药物，也是迄今为止产量最大、用量最大的蛋白质药物。当前，HPA的临床使用量巨大，国际上年使用量约达600吨，我国临床使用量也已达100吨左右，并将随着农村生活水平和医疗条件的改善不断增加。

现有技术中多采用低温乙醇工艺分离血浆蛋白，分离各组分多采用离心分离的方法，它存在如下缺点：一是离心剪切力对蛋白质的影响，离心分离转速每分钟一般在14000转以上，超高速剪切力对蛋白质沉淀颗粒造成的破坏，可能造成蛋白质立体结构的变化；二是离心分离采用超高速离心，一般达到14000转以上，机器产热需要接近—30℃以下的工艺冷媒在离心机转鼓周围提供冷环境，以降低转鼓超高速旋转产生的热量，防止蛋白受热而变性。同时离心操作间温度也要求—5℃以下，加上离心机本身的高耗电(3KW/台)，整体上能耗特别大，而且要求低温的操作条件；三是离心操作由于单台离心机转鼓容量有限，需要多台设备同时开启，不易进行管道自动化，人员劳动强度大，安全风险高，制品“跑、冒、滴、漏”不可避免，此法产品收率一般在2.5g/ml血浆以下，产品收率低。

另一种较为改进的方法是，采用加压过滤分离方法，但是在过滤之前，反应混悬液中必须加入足够量的硅藻土或珍珠岩的助滤剂，才能保证过滤的实现。而硅藻土或珍珠岩等助滤剂中主要成分是二氧化硅，占70～80％，其次要成分就是三氧化二铝，约占10～20％不等，这些三氧化二铝经过蛋白反应溶液后会有一定比例的铝离子形式存在进入制品溶液。从所周知，铝离子对人体有致癌作用，国家药品标准规定有关人血白蛋白质量标准都有明确的规定，必须小于200微克/升。另一方面，加压过滤所用的深层滤板，其主要成分是纤维素纤维、硅藻土、珍珠岩等，也同样有铝离子释放进入制品中；并且还存在超滤透析注射用水体积大的缺陷：为了去除生产过程中引入的铝离子，在生产过程的超滤工序中，至少需要首次浓缩液10 倍以上的注射用水进行反复透析，才有可能使制品中铝离子小于200微克/升，而且即便是再增加透析倍数，铝离子也始终会大于100微克/升。

中国专利公开文件CN102532304A，提出一种人血白蛋白的制备方法，其中分离组分Ⅰ +Ⅱ+Ⅲ、分离组分Ⅳ、分离组分Ⅴ、精制纯化四步骤的pH值偏低使收率偏低。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的缺陷，而提供一种人血白蛋白的制备方法，其收率明显提供。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案如下：人血白蛋白的制备方法，包括以下步骤：

第一步，分离组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ：将低温冰冻人血浆融化为液体状态，加入药用乙醇，至最终乙醇的体积达到人血浆和药用乙醇混合液总体积的22％，同时用1mol/L醋酸溶液调节人血浆和药用乙醇混合液的pH至6.4～6.6，并调节血浆蛋白质使其质量分数达到5.5％，调控温度至－5.5℃，搅拌2小时以上，静置4小时以上后，往混合液中按25g/L加入硅藻土或珍珠岩或二者组合作为助滤剂，采用加压过滤分离方法分离组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀；

第二步，分离组分Ⅳ：将第一步收集的压滤上清液，用1mol/L醋酸溶液调节pH至 6.2～6.4，加入药用乙醇至乙醇的体积达到第一步收集的压滤上清液和药用乙醇混合液总体积的40％，调控温度至－5℃，搅拌2小时以上，静置6小时以上，往混合液中按20g/L加入硅藻土或珍珠岩或二者组合作为助滤剂，采用加压过滤分离方法分离组分Ⅳ沉淀；

第三步：分离组分Ⅴ：将第二步收集的压滤上清液，用pH为4.0的缓冲液调节pH至 4.9～4.95，加入药用乙醇至上一步收集的压滤上清液和药用乙醇混合液总体积的40％，调控温度至－9℃，搅拌2小时以上，静置8小时以上，采用加压过滤分离方法分离组分Ⅴ沉淀；

第四步：精制纯化，采用用pH4.0缓冲液调节组分Ⅴ沉淀的pH 4.60～4.70，调控温度至－2～－3℃，静置4小时以上，深层过滤，收集过滤液进入下一工序；