[发明专利]鉴定灵长类抗体的方法

说明书

本申请提供了从灵长类动物中鉴定抗体的方法。在某些实施方式中，所述方法包括：对由合并的抗体生成B细胞群制备的cDNA进行测序，以获得多个抗体重链序列和多个抗体轻链序列；基于其CDR3序列将获得的抗体重链序列分成重链组；基于其CDR3序列将获得的抗体轻链序列分成轻链组；基于每组中抗体重链或轻链序列的数量，将重链组与轻链组配对；在每个配对的重链组和轻链组对中，将一个抗体重链序列与一个轻链序列配对；并测试包含所述配对的重链和轻链序列的候选抗体与抗原结合的情况。

相关申请的引用

本申请要求2016年5月10提交的美国临时申请62/333,941和2016年7月13日提交的美国申请15/208,850的优先权。其公开内容在此参考并入。

背景技术

抗体已经成为用于治疗各种病症，包括癌症、炎症和其它疾病的有效工具。然而，已经证明非人抗体诱导人免疫应答，这导致施用的抗体的中和并限制了这种抗体在治疗人类疾病中的应用。本领域尝试通过人源化来自非人动物(例如小鼠和兔)的单克隆抗体来克服该问题。例如，人源化抗体可以通过将适当的互补决定区(CDR)编码区段移植到人抗体框架中来实现。然而，通过CDR移植方法人源化的抗体通常存在与其特异性靶标的亲和力丧失的问题。

T细胞受体(TCR)是在T细胞表面发现的一种分子，负责识别与主要组织相容性复合体(MHC)分子结合的抗原。TCR和抗原之间的结合具有相对低的亲和力并且是退化的，即许多TCRs识别相同的抗原，并且许多抗原被相同的TCR识别。TCR或特异性抗原的亲和力使其具有用于治疗的价值，例如使用过继免疫治疗的癌症治疗。为了扩大使用过继性免疫治疗的能力，有必要选择富集的肽特异性效应T细胞，以有效攻击肿瘤细胞并避免对正常组织的攻击。为此目的，这种配体特异性T细胞的TCRs可被克隆并在活化的T细胞中表达为转基因TCR，使得转基因T细胞获得确定的特异性并且不具有攻击正常宿主组织的能力。

因此，有必要不断开发新的方法来开发抗体和T细胞受体。

发明概述

一方面，本公开涉及鉴定与抗原结合的灵长类动物抗体的方法。在一些实施方式中，该方法可以包括以下步骤：a)从已经被抗原免疫的灵长类动物中获得抗体生成B细胞群； b)从抗体生成B细胞群中获得(i)多个抗体重链序列和(ii)多个抗体轻链序列；c)将所述获得的多个抗体重链序列分成至少一个重链组，其中所述重链组中的所述抗体重链序列在谱系上相关；d)将所获得的多个抗体轻链序列分成至少一个轻链组，其中所述轻链组中的所述抗体轻链序列在谱系上相关；e)选择所述重链组和所述轻链组；f)将来自所述重链组的重链序列与来自所述轻链组的轻链序列配对；和g)测试包含配对重链和轻链序列的候选抗体与抗原结合的情况。

在某些实施方式中，重链组中所述抗体重链序列的CDR3区含有不超过5个相对于彼此的氨基酸差异，并且轻链组中所述抗体轻链序列的CDR3区含有不超过5个相对于彼此的氨基酸差异。

在某些实施方式中，所述抗原是人抗原。

在某些实施方式中，所述抗体重链序列是抗体重链可变区序列，所述抗体轻链序列是抗体轻链可变区序列。

在某些实施方式中，所述灵长类动物是旧大陆猴、猩猩、大猩猩或黑猩猩。在某些实施方式中，所述灵长类动物是食蟹猕猴，恒河猴或豚尾猕猴。

在某些实施方式中，重链组中所述抗体重链序列的CDR3区含有0、1或2个相对于彼此的氨基酸差异，并且轻链组中所述抗体轻链序列的CDR3区含有0、1或2个相对于彼此的氨基酸差异。

在某些实施方式中，步骤b)通过测序编码来自单个B细胞或其培养物的重链和轻链序列的cDNAs来完成。

在某些实施方式中，步骤b)通过测序编码由多个B细胞制备的重链和轻链序列的cDNAs来完成。